Диагноз и особенно дифференциальная диагностика респираторной формы ринопневмонии по клиническим и патологоанатомическим признакам затруднительна, так как остро протекающая инфекция верхних дыхательных путей может быть вызвана вирусами гриппа, парагриппа, респираторно-синтициальным вирусом, аденовирусом, реовируеом, риновирусом и герпесвирусом (Барроуз, 1968).
Клинические признаки, вызванные этими вирусами, весьма сходны, поэтому диагностика основывается на данных лабораторных исследований.
При абортах предварительный диагноз можно поставить по характерным патологоанатомическим изменениям в органах плода и обнаружению внутриядерных телец-включений. Следует иметь в виду, что при абортах на 7—11-м месяце жеребости, вызванных вирусом ринопневмонии, признаков аутолиза плода не бывает. У плодов, абортированных до 6-го месяца, а также при абортах, вызванных бактериальной инфекцией и вирусом артериита, всегда наблюдают аутолиз плодов.
Вейланд и Димитриадис (Weiland und Dirnitriadis, 1970), используя прямой метод иммунофлуоресценции, при исследовании препаратов от 70 лошадей неблагополучного хозяйства в 24 случаях получили положительные результаты, в 44—отрицательные. Только в двух случаях положительные результаты люминесценции не были подтверждены выделением вируса.
Надежная диагностика ринопневмонии основывается на выделении вируса в культурах клеток с последующей его идентификацией, а также путем обнаружения специфических антител в сыворотках переболевших животных. Ранее предложенные методы диагностики — реакция связывания комплемента с использованием антигенов, приготовленных из органов больных животных, а также реакция нейтрализации на хомяках для обнаружения антител у лошадей — представляют в настоящее время исторический интерес.
Идентификацию выделенного вируса проводят реакцией нейтрализации в чувствительных культурах клеток методом разведения вируса с интервалом 0,5 lg и постоянной дозой гипериммунной кроличьей сыворотки, разведенной 1:8. Средний индекс нейтрализации при этом составляет 3,6 lg. Ретроспективную диагностику проводят исследованием сывороток переболевших лошадей с постоянной дозой вируса (50-100 ТЦД50) и двукратными разведениями сывороток (Целлер и Тейфель, 1970).
По нашим данным (К. П. Юров, Н. И. Крюков), для диагностики болезни и идентификации вируса хорошие результаты дает непрямой метод иммунофлуоресценции с использованием сыворотки лошадей, естественно переболевших ринопневмонией, и антисыворотки к глобулинам лошади, меченной изотиоцианатом флуоресцеина. Вирус культивируют в первично-трипсинизированной культуре клеток почки эмбриона коровы, выращенной в пробирках на покровных стеклах.
Специфическое зелено-желтое свечение наблюдают через 14—16 часов после заражения в отдельных группах клеток в виде узкого ободка вокруг ядра, затем ширина светящейся зоны увеличивается и распространяется на большую часть цитоплазмы. В период выраженного цитопатического действия пораженные клетки имеют вид светящихся округлых образований, в которых не различаются ядра. В некоторых клетках антиген выявляется только в ядре, в большинстве клеток вокруг ядерной мембраны и в цитоплазме. Различия в локализации вирусного антигена в клетках связаны с особенностями репродукции вируса и неодинаковой чувствительностью отдельных популяций клеток в культуре ткани.