Дифференциация видов и биотипов бруцелл производится преимущественно в научно-исследовательских учреждениях с определенной направленностью-тематики.
Необходимо учитывать, что дифференциации подлежат только недиссоциированные штаммы. Поэтому культуру, предназначенную для дифференциации, следует готовить с момента высева патологического материала в условиях, способствующих сохранению бруцелл в S-форме. Отбор недиссоциированных культур может быть проведен по одному из следующих методов.
Проба с трипафлавином. Приготавливают раствор трипафлавина (1 : 500) в 0,9%-ном растворе хлорида натрия. На хорошо обезжиренное предметное стекло наносят каплю раствора трипафлавина, в которой тщательно размешивают небольшое количество (не более четверти стандартной петли) двухсуточной исследуемой культуры. Клетки диссоциированных культур бруцелл быстро, в течение нескольких секунд, образуют хорошо выраженные хлопья, что и определяет положительную реакцию. Жидкость просветляется, глыбки микробной массы тянутся за петлей.
При суспензировании недиссоциированных культур комкование клеток не наступает, взвесь остается гемогенной. Наблюдают реакцию в течение 8—10 мин.
Термоагглютинация. Двухсуточную культуру бруцелл с плотной среды смывают изотоническим раствором хлорида натрия так, чтобы концентрация была 1 млрд. микробных клеток в 1 мл смыва. В пробирке 2—3 мл. взвеси прогревают в водяной бане при 90° С в течение 30 мин. Результат учитывают через 30 мин, 1 ч и 24 ч. Диссоциированные клетки бруцелл склеиваются в пробирке, образуя комки, жидкость просветляется. При недиссоциированных клетках бруцелл сохраняется первоначальная гомогенность взвеси, осадок отсутствует.
Солевая агглютинация. Из двухсуточной исследуемой культуры бруцелл на плотной среде (ППГГА) готовят взвесь, содержащую 1 млрд. микробных клеток в 1, 2,5 и 5%-ных растворах хлорида натрия. Затем пробирки, содержащие по 3 мл указанных взвесей, ставят в термостат при 56° С на 24 ч, после чего производят учет результатов. При состоянии культуры бруцелл в R-форме наступает агрегация клеток, жидкость просветляется. Может быть оценена степень диссоциации. Положительный результат в 1%-ном солевом растворе оценивается в три креста, в 2,5%-ном — в два и в 5%-ном — в один крест. Взвесь недиссоциированной культуры остается неизмененной.
В нашей стране дифференциация видов и биотипов бруцелл проводится по схеме, разработанной бруцеллезным отделом ИЭМ АМН СССР на основе рекомендаций Комитета экспертов по бруцеллезу ФАО/ВОЗ (1971 г.).