Определение зараженности посадочного материала методом индексации. При индексации картофеля оценка пораженности вирусами дается по симптомам, появляющимся на побегах из испытываемых глазков.
Если индексация проводится в период с августа по январь, то состояние покоя предназначенных для проверки клубней следует нарушить, проведя обработку риндитом (0,3—10 мл на 1 кг клубней, 48 ч при 22 °С) или смесью гибберелловой кислоты и тиомочевины (10 мин). После естественного или искусственного прекращения состояния покоя из клубней вырезают глазки с крепкими ростками. Большинство вирусов картофеля легко передается механически, поэтому ножи следует дезинфицировать в 10%-ном растворе тринатрийфосфата после вырезки каждого глазка. Глазки выращивают в горшках диаметром 7 см или в пикировочных ящиках, заполненных малоплодородной обеззараженной смесью компоста, торфа и песка в соотношении 1:1:1. После высадки в почву глазки слегка присыпают торфом, чтобы защитить от подсыхания.
Горшки или ящики помещают в защищенную от проникновения тлей теплицу с температурой не выше 18 °С. Через 4—6 недель растения, развившиеся из глазков, оценивают на зараженность вирусами.
Идентификацию вирусов, вызвавших отмеченные симптомы, проводят различными методами. Вирусы мозаики картофеля идентифицируют с помощью серодиагностики или путем механической инокуляции индикаторных растений, в частности Gomphrena globosa или гибрида Solarium А-6. Для диагностики вируса скручивания листьев используют перенос инфекции с помощью тли Myzus persicae на Physalis floridana.
Флуоресцентно-микроскопическая диагностика МПО. Для флуоресцентно-микроскопического исследования необходимы максимально тонкие срезы побегов и черешков листьев. Срезы тканей толщиной около 10 мкм несколько часов фиксируют в 5%-ном растворе глутаральдегида в фосфатном буфере (pH 7,2). После 30-минутного окрашивания в 4,6-дпамидин-2-фенилиндоле (pH 7,2) срезы промывают в 2,4-миллимолярном растворе MgCl2 (pH 5,4), окрашивают 2 сек в берберин-сульфате, быстро ополаскивают в дистиллированной воде, мокрыми переносят на предметное стекло и накрывают покровным стеклом. Пробы просматривают в световом микроскопе с применением конденсатора падающего света и системы светофильтров, состоящей из фильтра-возбудителя, цветоделителя и фильтра-пробки. Источником света служит ртутная лампа 200 В.
Если у здоровых растений наблюдается вторичная флуоресценция клеточных ядер (слабое светло-голубое свечение), цитоплазмы и пластид (желтовато-зеленая флуоресценция), а также клеточных стенок, то у зараженных растений появляется сильная вторичная флуоресценция флоэмной ткани. Цвет ее — все переходы от голубого до желтовато-белого в зависимости от концентрации МПО и степени поражения ситовидных трубок. Таким образом, флуоресцентно-микроскопический метод позволяет оценивать степень поражения МПО. При проведении анализов следует использовать специальную литературу.
Тест на каллозу (резорциновая проба). Этот тест применяли в течение некоторого времени для диагностики вируса скручивания листьев. Он основан на отложении каллозы в ситовидных трубках молодых частей побегов и в клубнях растений, пораженных скручиванием. Для тестирования пригодны молодые побеги и закончившие развитие клубни. В первом случае готовят продольные срезы стебля, во втором — продольные срезы пуповинной части клубня и выдерживают их 5 минут в растворе резорциновой синей, хранившейся в открытом сосуде. Раствор состоит из 1 г резорцина, 1 мл концентрированного аммиака, поверхностно-активного вещества и 100 мл дистиллированной воды. После окрашивания препараты ополаскивают в водопроводной воде и просматривают под микроскопом. Срезы больных растений содержат многочисленные клетки с каллозными пробками, окрашенные в синий цвет. На первично зараженных растениях тест на каллозу дает более достоверные результаты, чем на вторично зараженных. Поздние заражения с помощью этого метода обнаружить не удается.