В предварительных опытах, проведенных на яичниках неполовозрелых крыс, ткань, измельченную в физиологическом растворе с примесью 15% глицерина, охлаждали до —79°.
После оттаивания в ней не было обнаружено ни одного нормального яйца, а спустя день после ауто — и гомотрансплантации яйца и фолликулы на всех стадиях развития, по-видимому, дегенерировали. Однако на 4-й день после трансплантации уже имелось много примордиальных фолликулов. В последующие 30 дней трансплантаты из замороженной ткани неполовозрелых крыс содержали больше граафовых пузырьков, чем трансплантаты из замороженной ткани взрослых животных. Ауто — и гомотрансплантаты яичников неполовозрелых крыс, исследованные в период между 38 днями и 16 неделями после имплантации, не отличались от трансплантатов взрослых животных. Они имели хорошо разветвленную сеть сосудов, распространенные участки неравномерно образованных скоплений лютеиновых клеток и небольшие ацинусы, выстланные эпителиальными клетками. В то же время они не содержали ни яиц, ни фолликулов, хотя эстральный цикл у некоторых животных, судя по влагалищным мазкам, протекал нормально. Когда в качестве среды использовали сыворотку с добавлением 15% глицерина, спустя 10—20 недель после трансплантации замороженных яичников обнаруживали фолликулы, содержащие яйца.
Гистологическое исследование трансплантатов ткани яичников неполовозрелых крыс упрощалось, когда яичники перед обработкой глицерином, замораживанием, оттаиванием и имплантацией разрезали только на две части. После пропитывания ткани в физиологическом растворе, содержащем 15% глицерина, большая часть яиц и окружающих их фолликулярных клеток имела тяжелые повреждения. Правда, некоторые зернистые клетки в крупных и средних фолликулах, а также часть яиц в примордиальных фолликулах имели нормальный вид. Половинки яичников, охлажденные до —79°, а затем согретые, после обработки имели более тяжелые повреждения, но и здесь в примордиальных фолликулах оставалось какое-то число, по-видимому, нормальных яиц. Спустя 1 день после гомотрансплантации незамороженных яичников неполовозрелых животных взрослым крысам все трансплантаты были хорошо васкуляризованы и содержали нормальные яйца. На этой стадии гомотрапсплан — таты замороженной ткани имели самую различную васкуляризацию и внешний вид. Хорошо васкуляризованная замороженная ткань трансплантата через 1 день после пересадки уже была инфильтрирована фибробластами и содержала много примордиальных фолликулов и яиц, окруженных одним-двумя слоями зернистых клеток. Трансплантаты с плохой васкуляризацией были инфильтрированы полиморфноядерными лейкоцитами и не содержали нормальных яиц.
Доля нормально развивающихся яиц в замороженных яичниках крысят спустя 24 час после гомотрансплантации составляла 1—5% первоначального числа их в имплантируемой ткани. Яйца, взятые на этой стадии, не всегда развивались. В нормальном яичнике в обычных условиях какая-то часть фолликулов дегенерирует на протяжении всей жизни животного, тогда как другая часть достигает зрелости. В период между 2-м и 8-м днями после имплантации дегенерировавшая ткань уменьшалась в объеме, а фолликулы были крупнее, чем в трансплантатах, исследованных спустя 24 час. Через 6— 8 дней некоторые фолликулы достигали 150—120 в диаметре. Наблюдались также фолликулы, не содержащие яиц и состоящие из зернистых клеток. Некоторые из них, возможно, раньше содержали яйца, тогда как другие могли развиться из выживших зернистых клеток. На 10-й день утолщение внутренней оболочки более крупных фолликулов указывало на наступление процесса лютеинизации. Спустя 28 дней многие фолликулы были окружены лютеиновыми клетками. Были обнаружены также желтые тела, причем некоторые из них содержали остатки дегенерировавших яиц.
Гомотрансплантаты ткани яичников были обычно хуже васкуляризованы, чем аутотрансплантаты яичников неполовозрелых крыс того же возраста. Кроме того, они отличались присутствием лимфоцитов: в некоторых трансплантатах их было немного, в других огромное количество, а в третьих лимфоциты образовывали плотную зону. В аутотрансплантатах овуляция происходила чаще, чем в гомотрансплантатах. Многие фолликулы подвергались лютеинизации без разрыва, так что в них сохранились яйца. Возможно, структура гомотрансплантатов нарушалась в результате уменьшившегося кровоснабжения, что, в свою очередь, снижало доставку гонадотропных гормонов или нарушало их баланс. Попытки изменить эндокринную среду гомотрансплантатов путем введения реципиенту сыворотки жеребой кобылы, чтобы обеспечить гонадотропный стимул, практически не увенчались успехом.
Обнадеживал тот факт, что иногда овуляция происходил даже в ткани яичника, имплантированного другой особи в необычное место — под кожу. Было испробовано много различных методик с целью увеличения числа развивающихся яиц, переживших воздействие глицерином и низкой температурой. Так, например, пробовали постепенно повышать концентрацию глицерина, которым обрабатывали яичники неполовозрелых крыс при комнатной температуре или при +38°. В некоторых опытах перед гомотрансплантацией из ткани постепенно удаляли глицерин. В других яичники охлаждали до —79°, оттаивали и трансплантировали либо с глицерином, либо после предварительного постепенного его удаления. Животных забивали спустя 10 дней после гомотрансплантации, поскольку в последующие дни обычно происходила овуляция или лютеинизация фолликулов и число яиц уменьшалось. На серийных срезах определяли число нормальных яиц на всех стадиях развития. Результаты подсчета показали, что яичники неполовозрелых животных, обработанные и замороженные в крысиной сыворотке с примесью глицерина, содержали лишь ненамного больше яиц, чем яичники, обработанные физиологическим раствором с глицерином, но зато при использовании сыворотки яйца не сморщивались. Ни постепенное добавление глицерина в тепле, ни любое другое усовершенствование методики не дали значительного повышения степени выживаемости яиц в гомотрансплантатах яичников неполовозрелых крыс. Наблюдали и значительные различия в числе переживших яиц в яичниках, обработанных аналогичным способом, но имплантированных под кожу различным животным. Число развивающихся яиц в замороженных трансплантатах, по-видимому, обусловлено не столько методикой охлаждения и оттаивания, сколько скоростью восстановления хорошей васкуляризации и другими условиями в месте имплантации.
Вполне вероятно, что хорошее кровоснабжение устанавливается быстрее при ортотопической имплантации замороженной ткани яичника в брюшинную полость. В таких условиях можно было проверить после овуляции оплодотворяемость яиц, переживших замораживание.