В последние годы предприняты многочисленные поиски методов прижизненной диагностики гельминтозов с помощью иммунологических методов — серологических и аллергических реакций.
Практически применяют их при эхинококкозе, трихинеллезе. Так, А. С. Бессонов (1967) предложил метод иммунологической диагностики трихинеллеза, а Р. С. Шульц — эхинококкоза. Однако все методы недостаточно совершенны: низка эффективность иммунологических реакций, нередко антигены дают неспецифические перекрестные реакции, притом не только между биологически близкими видами, но и видами из другого класса гельминтов и даже бактериями и простейшими.
При обработке гомогенатов гельминтов изменяются структура белков и их активность, специфические реактивные молекулярные структуры перераспределяются таким образом, что количественное содержание белков в антигене не позволяет с достоверностью определить его иммунологическую ценность.
Почти при всех основных гельминтозах испытаны с положительным результатом кожная аллергическая реакция (внутрикожная проба) и реакция связывания комплемента, преципитиновые реакции: кольцепреципитации, микропреципитации на живых личинках, реакция двойной диффузии в гель по Ухтерлони, реакция агглютинации прямая и пассивная, латексагглютинации и др.
Внутрикожная проба. В последние два десятилетия широко применяют внутрикожную аллергическую пробу при эхинококкозе овец. Наибольшее число правильных показаний дает очищенный антиген. По данным В. Т. Рамазанова (1968), аллергическая проба в серии опытов давала правильные показания на 75—80%. Отрицательные реакции часто были при эхинококкозе легких, особенно при ацефалоцистах, нагноении эхинококковых цист.
Специфическая сенсибилизация в результате предшествовавшего введения одной диагностической дозы аллергена не позволяет повторно проводить пробы и ставить диагноз на эхинококкоз сельскохозяйственных животных.
Для прижизненной диагностики ценуроза овец (аллергическая проба) лучший результат дает полисахаридный антиген (Ронжина, 1961; Шульц, 1964; Исмагилова, 1968). Аллергические реакции применяли при цистицеркозе свиней, кроликов, крупного рогатого скота, аскаридозе свиней, метастронгилезе, сетариозе, диктиокаулезе и других гельминтозах, однако из-за сенсибилизации организма использование их ограничено.
Реакция сколексопреципитации (РСкП). Впервые ее разработали применительно к диагностике эхинококкоза Р. С. Шульц и Р. Г. Исмагилова (1963). РСкП очень проста по своим показаниям, однако для диагностики эхинококкоза с помощью этой реакции необходимы постоянно свежие сколексы. М. В. Алферова (1968) испытала эту реакцию при цистицеркозе крупного рогатого скота и пришла к выводу, что она достаточно чувствительна, но требуется более тщательная доработка.
Для прижизненной диагностики цистицеркоза крупного рогатого скота E. С. Лейкина с соавт. (1968) рекомендовали реакцию латекс-агглютинации с антигеном из лиофилизированных цистицерков. Чувствительность этой реакции оказалась равной 94—97%. Ь. К. Омаровым (1973) разработана реакция флюоресцирующих антител для диагностики цистицеркоза с высоким показателем чувствительности.
Получены хорошие показатели специфичности и чувствительности реакции связанного комплемента применительно к диагностике фасциолеза крупного рогатого скота (Полуэктова, 1978). Для целей иммунодиагностики успешно применяют реакции флуоресцирующих антител. В качестве антигенов служат цельные или фрагментированные организмы, яйца или личинки гельминтов. При аскаридозе свиней Л. Е. Верета (1969) отметил высокую чувствительность метода флуоресцирующих антител (антитела обнаружены на 7-й день после заражения). При трихинеллезе реакция иммунофлуоресценции прямого типа введена Jackson (1959). Антигеном служили инкапсулированные личинки трихинелл. Последних инкубировали в иммунной меченой сыворотке, в смеси иммунной меченой и нормальной сыворотками. Все меченые иммунные сыворотки вызывали флуоресценцию пищеварительного тракта личинок. Реакцию непрямой флуоресценции испытали несколько авторов (Sadun, 1961; Sadun et al., 1962; Barata et al., 1963) и установили большую ее чувствительность при диагностике трихинеллеза. Kagan (1964) подтвердил, что флуоресцирующие антитела могут быть выявлены раньше, чем комплементсвязывающие.
Реакция иммунофлуоресценции прямого типа позволила успешно выявлять участки локализации антигена и пути миграции личинок трихинелл. Начиная с 4-го дня после заражения, флуоресцирующие участки обнаруживали в капиллярах печени, синусах и просвете кровеносных сосудов селезенки белых мышей. Это свидетельствовало о миграции личинок трихинелл через внутренние органы (Берчев, 1966). Результатами более объективной оценки иммунофлуоресценции нужно считать установление большого числа неспецифических реакций при исследовании сывороток от индивидов, зараженных различного рода паразитами и незараженных трихинеллами.
Практическое применение реакции флуоресцирующих антител затрудняется сложностью теста, требующего определенной аппаратуры для приготовления антигена и учета реакции, необходимых антивидовых глобулинов и использования дорогих и дефицитных реактивов.
Реакция энзим-меченых антител. Основана она на переводе антигенов в нерастворимое состояние путем пассивной адсорбции на твердой поверхности. С помощью реакции можно количественно определять специфические антитела. Для ее постановки используют растворимый антиген, которым покрывают стенки пробирок из полистирола, и меченный пероксидазой или фосфатазой антииммуноглобулин (Voller, 1976). Реакция энзим-меченных антител значительно специфичнее и чувствительнее других методов иммунодиагностики (Huldt et al., 1975; Bout et al., 1976; Me Laren et al., 1979; Белозеров, 1982; Полетаева, 1983).
Большинство гельминтологов (иммунологов) при постановке этой реакции стремятся получить специфичный и высокочувствительный антиген, определить его химический состав, который бы позволил точнее воспроизводить результаты и достигнуть надлежащей стандартизации. Однако добиться этого трудно, так как невыяснено, какие стадии развития гельминта являются наиболее удобными для получения антигенов. В различных лабораториях антигены готовят произвольно. Поэтому любой антиген, даже если он получен от одного и того же паразита, отличен от другого и не соответствует требованиям стандартизации. Гельминтные антигены не химическое вещество, а биологический материал сложного строения, поэтому необходима полная стандартизация антигенов из гельминтов, рекомендуемых для серологической диагностики.
Посмертная (послеубойная) диагностика гельминтозов. Гельминты паразитируют во всех органах и тканях, поэтому истинную картину поражения можно установить только после убоя или падежа животных с помощью методики гельминтологических вскрытий, разработанной К. И. Скрябиным. Количественный подсчет всех видов гельминтов, которыми поражено животное, можно произвести методом полных гельминтологических вскрытий. Если требуется определить место нахождения того или иного гельминта, то проводят полное гельминтологическое исследование отдельных органов. Неполным гельминтологическим вскрытием предусматривается извлечение из органов и тканей лишь отдельных гельминтов.
Гельминты различных видов в процессе физиологического развития приспособились к паразитированию в организме определенного вида животных в отдельных органах и тканях, вызывая соответствующие гельминтозы. Знание мест локализации гельминтов в организме окончательного хозяина позволяет более быстро диагностировать тот или иной гельминтоз.