При работе с возбудителями, образующими включения, лежащие на грани разрешающей способности обычного светового микроскопа, или с возбудителями, не образующими включений, помимо электронной микроскопии можно применить специальные методы окраски обычных парафиновых срезов, которые дают возможность косвенно судить о наличии вируса в клетке.
При диагностике гранулеза в начальный период заболевания окраска по Фельгену позволяет выявлять в ядрах инфицированных клеток характерные сетчатые структуры. Реакция Фельгена удовлетворительно проходит на материале, фиксированном по методу Карнуа и Лилли в формалине и некоторых других смесях. Рабочими растворами являются однонормальный раствор соляной кислоты, реактив Шиффа и сернистая вода. Для реактива Шиффа необходим чистый основной фуксин для фуксинсернистой кислоты. Техника приготовления реактива следующая. К 200 мл кипящей бидистиллированной воды добавляют 1 г основного фуксина; раствор кипятят в течение 5 мин, фильтруют и охлаждают. После добавления 2 г метабисульфита калия или натрия при непрерывном встряхивании в смесь приливают 20 мл однонормальной соляной кислоты. Для обесцвечивания раствор сутки выдерживают в темноте. Готовый реактив Шиффа бесцветный или желтоватый. Качество его в большой степени зависит от основного фуксина.
Перед окраской срезы, доведенные до воды, помещают для гидролиза в однонормальную соляную кислоту при температуре 60° С. При фиксации в жидкости Карнуа гидролиз длится 6— 12 мин, затем срезы ополаскивают дистиллированной водой, быстро обрабатывают соляной кислотой и в течение 1—1,5 ч окрашивают реактивом Шиффа, после чего помещают последовательно в 3 порции сернистой воды (на 2 мин в каждую) и тщательно промывают.
Группа иридисцентных вирусов рода Pseudomoratorvirus, поражающих некоторые виды лесных насекомых при экспериментальном заражении, включений не образует. Размеры вириона (диаметр 150—200 ммк) не позволяют наблюдать его в световом микроскопе. Большинство исследований иридисцентно-вирусных заболеваний насекомых проведено с использованием электронной микроскопии, однако для предварительного отбора материала такая техника не практична. Более целесообразна методика, предложенная американскими исследователями. Процедура приготовления препаратов следующая. Личинок, фиксированных в смеси Карнуа, заключают в парафин и готовят срезы толщиной 4—6 мк. При этом здоровую и больную личинки заключают в один парафиновый блок так, что ткани каждого типа чередуются на узкой полоске предметного стекла.
Ход окраски следующий. После удаления парафина ксилолом срезы через нисходящую батарею спиртов доводят до воды и красят в течение 5 мин раствором гематоксилина. Затем препарат помещают на 10 с в дистиллированную воду, 30 с обесцвечивают в 1 % — ной соляной кислоте, смывают кислоту водой и выдерживают в 0,35%-ной гидроокиси аммония 2 мин. После предварительной промывки в дистиллированной воде срезы дополнительно окрашивают в течение 3 мин эозином и заключают в нейтральную среду. Просматривают препараты в проходящем и в темном поле. Пораженные вирусом клетки окрашиваются в пурпурно-коричневый цвет, кутикула — в зеленый, клетки эпидермиса — в светлый красновато-коричневый, мышечная ткань — в желтый, ганглии и нервные тяжи — в желто-зеленый, мальпигиевы сосуды — в желтовато-зеленый со светло-коричневым ядром, жировое тело — в зеленый с коричневым ядром, кожный эпителий — в желтый, изредка с красноватым оттенком.
Как показывает опыт отечественных и зарубежных патологов, ведущее место в инфекционной патологии насекомых — вредителей лесного хозяйства занимают вирусы, образующие включения; степень воздействия вирусов из других групп не изучена. В случаях эпизоотий неясной природы, когда не удается идентифицировать возбудителя прямым микроскопированием тканей, необходимы биопробы на насекомых.