Мы уже отмечали, что при работе с термофилами обычно применяются общепринятые питательные среды.
Правда, в некоторых случаях термофильные бактерии проявляют значительную потребность в дополнительных факторах роста. Это следует учесть при составлении питательных сред.
Вообще при определении заселенности исследуемых субстратов наиболее часто ограничиваются учетом бактериальных форм, растущих на мясо-пептонном агаре. Лишь при специальных заданиях изучают численность микробов, относимых к тем или иным физиологическим группам.
Многие исследователи при работе с аэробными термофильными бактериями широко пользуются средами с триптически переваренным белком («триптонно-сахарозной средой»).
Для выращивания термофильных анаэробных бактерий можно брать обычно применяющиеся среды с восстанавливающими веществами (экстракт печени, цистин и т. д.). Медарис советовал для данной цели пользоваться экстрактами из шпината, гороха и т. д. Мак Клюнг и Мак Кой приготовляли среды с печенью и кукурузной мукой, гороховый экстракт с сахаром, триптонную среду с сахаром и т. д. Эти среды можно агаризовать.
Кастелл брал для выращивания анаэробов растительные отвары.
Наиболее часто для выявления термофилов пользуются температурой 60°. Иногда берется несколько пониженная температура в 50—55°. Последний прием мы считаем нецелесообразным, исходя из своих работ по исследованию температур развития мезофильных бактерий. Как было показано, бактерии южных почв адаптированы к несколько повышенным температурам, поэтому большинство из них кончает развиваться в интервале 50—55°, образуя при температурах, близких к максимальным, точечные колонии. В силу отмеченного, указанная температура не дает уверенности в устранении значительного числа мезофильных микроорганизмов. Эти соображения заставили нас при учете термофилов всегда пользоваться температурой 60°.
При посеве на агаровые среды термофильные бактерии развиваются очень быстро. Их учет обычно производится через сутки после посева. Более двух суток чашки обычно не выдерживаются. Чтобы агаровая среда при ее нахождении в термостате, установленном на высокую температуру, не высыхала, ее следует наливать в чашки Петри более высоким слоем. С этой же целью целесообразно чашки с произведенным посевом ставить во влажную камеру.
Следует указать, что де Круи, заботясь о сохранении влаги в питательной среде во время ее нахождения в термостате при повышенной температуре, рекомендовал пользоваться особыми герметически закрывающимися чашками Петри. Это предложение в практику, однако, не вошло.
При суждении о результатах исследований надо принять во внимание, что нередко мнение о богатстве некоторых субстратов термофилами создавалось на основании опытов, проведенных весьма условной методикой. Так, иногда микробиологи пользовались методом обогащения. При этом жидкая питательная среда, большей частью мясо-пептонный бульон, заражалась испытуемым материалом и выдерживалась при высокой температуре. В случае помутнения среды и обнаружения в ней микроорганизмов факт нахождения термофилов считался установленным.
Совершенно очевидно, что при подобных опытах не могли быть подмечены количественные различия в богатстве отдельных субстратов термофилами. С этим, однако, не всегда считались, и нередко дававшиеся заключения о значительной обсемененноети различных материалов данными микроорганизмами следует считать недостаточно обоснованными.
Метод обогащения может быть использован лишь для качественной пробы. Количественный учет термофилов на жидких средах следует проводить лишь методом титра.
Некоторые замечания, сделанные нами в связи с культивированием аммонификаторов (выбор температуры, введение в среду дополнительных веществ и т. д.), могут быть распространены и на другие группы сапрофитных термофилов.