Выделение вируса из проб патологического материала. Вирус можно получать как на животных, так и в культурах чувствительных клеток.
Неиммунным лошадям испытуемый материал (кровь, взятую от больной лошади в период гипертермии, или селезенку от павшего животного), предварительно проверенный на бактериальную стерильность, после его соответствующей подготовки (суспендирование, добавление антибиотиков, центрифугирование) вводят внутривенно в объеме 5 мл (10%-ная суспензия). На 4—5-е сутки у животных повышается температура, а на 10—15-е сутки они погибают от чумы. Гибель мышей после введения материала в мозг наступает между 4-м и 22-м днем. У мышей, находящихся в агональном состоянии, берут стерильно мозг и из него готовят суспензию 1:10 на физиологическом растворе с pH 7,5, которую в дальнейшем используют для пассирования на этих животных. Хомякам материал вводят в сердечную полость. В период подъема температуры тела (обычно на 8-й день), хомяков убивают и берут от них селезенку, содержащую вирус. По сообщению Эразмуса (1964), помимо животных, выделять вирус можно на чувствительных к нему культурах клеток. Александер (1938) для выделения вируса использовал развивающиеся куриные эмбрионы, в мозге которых происходит репродукция вируса.
Идентификация вируса при помощи реакции связывания комплемента. По данным Шаха (К. V. Shah, 1964), эту реакцию используют для обнаружения комплемент-связывающего антигена вируса африканской чумы лошадей в мозге больных мышей, зараженных интрацеребрально вируссодержащим материалом, взятым от больных или павших от чумы животных, а также для выявления комплементсвязывающих антител в сыворотках больных, переболевших и привитых животных. Применение реакции связывания комплемента для серологической идентификации вируса особенно целесообразно из-за наличия у штаммов этого возбудителя, относящихся к различным антигенным типам, Общего комплемент-связывающего антигена. В реакции в качестве специфических используют сыворотку от лошадей, переболевших чумой, или сыворотку кроликов и морских свинок, гипериммунизированных вирусом чумы лошадей. Специфический антиген готовят из инфицированного мозга мышей или морских свинок по методу ацетоново-эфирной или сахарозо-ацетонозой экстракции, описанному Кларком и Казалсом (D. Н. Clarke, Casals, 1958).
Идентификация вируса чумы лошадей при помощи реакции диффузионной преципитации. В качестве исходного материала для получения испытуемого антигена используют селезенку лошади, павшей от африканской чумы. Сначала ткань суспендируют в физиологическом растворе, затем центрифугируют, надосадочную жидкость обрабатывают 0,5%-ным раствором формалина и используют как антиген. Можно брать и вирулентную кровь. Как специфическая берется сыворотка, полученная от кроликов после пятикратного еженедельного внутривенного введения по 1 мл 10%-ной суспензии селезенки. Реакцию ставят в агаровом геле при комнатной температуре. Учет проводят через 24, 48 и 72 часа. По сообщению Хука и Ансари (М. М. Hug, М. Ansari, 1962), антиген вируса чумы лошадей со специфической сывороткой образовывает линию преципитации, в то время как с нормальной (контрольной) сывороткой этого не наблюдается. Реакция проста в постановке, ее можно использовать для исследования вируссодержащих материалов (органов и тканей) на присутствие в них преципитирующего антигена.