Erwinia amylowora (BuriH) Winslow et al.
Бактериальный ожог считается одним из наиболее опасных заболеваний плодовых культур. Болезнь вызывается бактерией Erwinia amylowora и поражает как культурные, так и дикорастущие растения семейства розоцветных.
Возбудитель заболевания — бактерия Erwinia amylowora. Это подвижные перитрихиальные палочки, размером 0,7—0,1 х 0,9—0,5 мкм, спор и капсул не образуют; расположены одиночно, парами и короткими цепочками, грамотрицательные, некислотоустойчивые, аэробы или факультативные анаэробы.
На мясо-пептонном агаре колонии круглые, маленькие, с ровными краями, иногда опалесцирующие, маслянистой консистенции. На мясо-пептонном бульоне образуют небольшую зернистую пленку, при этом бульон мутнеет.
Из пригодного для анализа образца, предварительно промытого водопроводной и стерильной водой, вырезают кусочек на границе больной и здоровой тканей. Его помещают в стерильную воду, тщательно растирают в ступке, и мацерат наносят на поверхность питательной среды (картофельно-глюкозный или мясо-пептонный агар) в чашки Петри, которые ставят в термостат при t 28—30°С. Через 48 часов инкубации проверяют рост бактерии и колонии, похожие на Erwinia amylowora, переносят в пробирки со скошенной средой Кинга (состав среды: 1 литр дистиллированной воды, 20 г пептона, 15 г мытого долгунцового агар-агара, 10 мл глицерина, 1,5 г КН2РO4 и 1,5 г MgSO4.7H2O. Все это стерилизуют при давлении 1,5 атм в течение 20 минут). Если штамм окрашивает среду Кинга в флюоресцирующий зеленый цвет, то он относится к роду Pseudomonas. Бактерия рода Erwinia такого флюоресцирующего пигмента на этой среде не образует.
Для распознавания грамположительных и грамотрицательных бактерий используют быстрый метод Рью, где реагентом служит 3%-ный раствор КОН, который наносится на предметное стекло в количестве 1—2 капель. Одну петлю исследуемой культуры вносят в каплю щелочи и растирают, наблюдая за ее вязкостью. Если культура становится вязкой и тянется за петлей на расстояние 1,5—2 см и более, то испытываемая культура грамотрицательная. Грамположительные культуры не дают вязких образований и за петлей не тянутся.
Проверяют патогенность штаммов на молодых незрелых плодах груши по методу Уайта. Этот тест является одним из основных при определении возбудителя ожога. Суспензию бактерий (концентрация 10 клеток/мл) сначала наносят на плод груши, а затем в этом месте его три раза прокалывают энтомологической булавкой под кожицу на разную глубину. Операцию повторяют несколько раз. Затем накапывают бактериальную суспензию и помещают во влажную камеру (для этой цели используют закрытые кристаллизаторы со стерильной ватной подстилкой). Контроль — уколы на отдельной груше со стерильной водой. Если через двое суток на месте укола появляются некротические пятна и выделяется молочно-белый экссудат, то считают, что выделенные бактерии являются Erwinia amylowora, флюоресцирующие бактерии — Pseudomonas syringae (вызывают некроз ткани груши без выделения экссудата). Груши собирают незрелыми и хранят в холодильнике в течение 3—6 месяцев.
С выделенными бактериями проводят микроскопическую реакцию агглютинации на стекле с антисывороткой, полученной от кролика при введении ему чистой культуры Erwinia amylowora. Для контроля самоагглютинации берут нормальную сыворотку от неиммунизированного животного.
При положительной реакции агглютинации с выделенными бактериями идентичность их Erwinia amylowora бесспорна.