В фитопатологии полностью сохраняют свое значение постулаты Коха, согласно которым для достоверного установления бактериальной (или грибной) этиологии болезни необходимо выполнить определенные требования:
— выделить возбудителя болезни;
— вызвать на здоровых растениях те же симптомы, что и на исходных больных растениях, путем инокуляции чистой культурой возбудителя;
— повторно изолировать возбудителя из искусственно зараженных растений;
— сравнить реизолированного возбудителя с исходным; оба организма должные быть идентичными.
В данном разделе описаны некоторые методы заражения, применяемые в фитобактериологии.
Для проверки на патогенность используют, как правило, те виды растений, из которых был изолирован возбудитель. Чтобы точнее установить круг его растений-хозяев, в исследования целесообразно вовлечь и другие виды.
Испытания на патогенность возбудителей пятнистостей листьев проводят на молодых хорошо развитых растениях. Исследуемые культуры готовят на косом агаре и используют в возрасте 24— 48 ч. Бактерии смывают стерильной водой и полученную суспензию доводят до конкретной концентрации (число клеток на 1 мл). Плотность суспензии определяют с помощью измерителя мутности либо так называемым «методом оконной рамы», т. е. разбавляют суспензию в такой степени, чтобы через нее можно было различить оконную раму при дневном свете.
Заражение путем опрыскивания или инъекции бактериальной суспензии. Для обнаружения возбудителей пятнистостей листьев тест-растения инокулируют путем опрыскивания бактериальной суспензией. Поскольку эти патогены проникают в растения через устьица, последние при искусственной инокуляции должны быть максимально открытыми. Для этого тест-растения перед инокуляцией помещают на 1—2 дня во влажную камеру (например, под стеклянный колпак). После инокуляции растения также необходимо выдержать при повышенной влажности воздуха (80—95%) в течение 2—3 дней.
Инъекции бактериальной суспензии в межклетники обычно делают с помощью медицинского шприца. Иглой шприца с затупленным концом прокалывают эпидермис с нижней стороны листа и осторожно вводят суспензию. Предварительное натирание листа карборундом в некоторых случаях повышает эффект заражения.
Заражение через ранки. Метод состоит в поранении стеблей или мясистых частей растений иглой или скальпелем с последующей инокуляцией бактериями. Для заражения возбудителями увядания корни срезают у основания и растения на 2—3 ч ставят в бактериальную суспензию. Молодые листья и почки обламывают, возникающие при этом свежие ранки смачивают суспензией.
Бактериальная природа заболевания считается доказанной лишь в том случае, если при искусственном заражении на растении появляются типичные симптомы. Продолжительность инкубационного периода варьирует от нескольких дней до многих недель.