Для определения устойчивости вредителей к инсектицидам или акарицидам в распоряжение службы защиты растений постоянно передаются все более и более простые тест-методы.
Ниже приведены некоторые методы, при выполнении которых в диагностических лабораториях не нужны особые предпосылки.
Методический принцип заключается в том, что у нормально восприимчивой расы подопытных вредителей определенная заданная концентрация препарата обусловливает по меньшей мере 95%-ную смертность. Если же при испытании показатели смертности окажутся ниже 95%, то это указывает на устойчивость.
Метод погружения дисков листьев для паутинных клещей. Этот тест, разработанный Отто с соавт. на основе метода Фрицше с соавт., может быть проведен как с имаго, так и с яйцами паутинного клеща Tetranychus urticae.
Тест со взрослыми клещами требует не менее 60 самок, отловленных непосредственно в полевых условиях либо (если число клещей невелико) разведенных с соблюдением строгой изоляции на молодых растениях кустовой фасоли.
При подготовке к тесту фотографические кюветы заполняют на 3/4 водой (35X30X6 см) и кладут в них полоски стекла шириной 6 и длиной 34 см. Для каждой испытываемой популяции нужна отдельная пластинка, для акарицида и для контроля должно быть предусмотрено по отдельной кювете. Стеклянные пластинки накрывают полосками фильтровальной бумаги такого же размера, поперек них с промежутками в 2 см кладут другие полоски фильтровальной бумаги шириной 2,5 см, располагая их таким образом, чтобы одним концом они погрузились в воду. Благодаря этому фильтровальная бумага, покрывающая стеклянные пластинки, постоянно поддерживается во влажном состоянии.
Из семядольных листьев фасоли вырезают пробочником диски диаметром 18 мм, погружают их на 5 сек в раствор акарицида заданной концентрации и сразу же помещают верхней стороной на стеклянные пластинки, покрытые влажной фильтровальной бумагой. Для каждой популяции нужно не менее пяти обработанных дисков и пяти необработанных (контроль). После высыхания раствора на каждый диск подсаживают по 12 самок. Результаты опыта оценивают через три дня после обработки, регистрируя под стереомикроскопом число погибших и поврежденных особей. Если их доля составляет свыше 95% (57 погибших или поврежденных), устойчивость отсутствует.
При испытании овицидного действия акарицидов, подготовка к которому проводится так же, как при тесте со взрослыми паутинными клещами, на полоски влажной фильтровальной бумаги сначала кладут необработанные диски листьев. Затем на каждый диск переносят по 12 взрослых самок с целью получения яйцекладок и через 24 ч удаляют их. Для теста с одним акарицидом и одной популяцией клещей нужно не менее 50 яиц на дисках и столько же для контроля (без акарицида). На следующий день диски листьев с яйцами погружают каждый в отдельности на 5 сек в подготовленный раствор акарицида и сразу же вновь переносят на фильтровальную бумагу; контрольные, диски погружают в воду. После отрождения личинок в контроле (примерно через 8 ч после яйцекладки) проводят учет и статистическую оценку результатов опыта, регистрируя под стереомикроскопом невылупившихся и мертвых личинок. Если их доля составляет менее 95% всей популяции, то можно сделать вывод о наличии устойчивости к акарициду.
Быстрый тест с погружением для тлей. Быстрый тест с погружением пригоден для оценок устойчивости зеленой персиковой тли (Myzus persicae) и свекловичной тли (Aphis jabae). Это максимально упрощенная модификация метода Фрицше с соавт., позволяющая получать результаты уже через 2—3 ч. Однако для точных оценок целесообразно пользоваться исходным методом Фрицше.
Тест с персиковой тлей проводится в открытых чашках Петри (диаметр 60 мм), в которые вложено по два влажных круглых фильтра. Для каждой испытываемой популяции нужно 10 чашек, столько же берется для контроля.
Из листьев, пораженных тлями (насекомых отлавливают в естественных условиях или при необходимости разводят при строгой изоляции), осторожно вырезают пробочником не менее 20 дисков (по 10 на вариант опыта и на контроль). На каждом диске должно быть не менее 20 бескрылых тлей или их личинок. Если подобную плотность заселения не удается обеспечить, используют соответственно большее число дисков.
Вырезанные диски сразу погружают на 5 сек в раствор инсектицида заданной концентрации и затем помещают в чашки Петри. Контрольные диски погружают в воду, в которую добавлено несколько капель смачивателя.
Результаты оценивают под стереомикроскопом через 2 ч после обработки инсектицидами, определяя долю погибших и поврежденных тлей. Если она меньше 95%, можно сделать вывод о наличии устойчивости к инсектицидам.
Для теста со свекловичной тлей на посеве соответствующей культуры отбирают не менее 10 заселенных тлями стеблей длиной около 8—10 см. На каждом стебле должно быть около 40 бескрылых тлей или личинок старших возрастов. Для каждого варианта опыта и контроля нужно 200 насекомых. Стебли сразу погружают в раствор инсектицида (контроль — вода) и, стряхнув капли раствора, поодиночке переносят в заполненные водой колбы Эрленмейера объемом 50 мл. Нижнюю треть стеблей рекомендуется обернуть целлюлозой и плотно вставить в горлышко колбы. Сверху закрепляют кусочек алюминиевой фольги (35 X 35 мм) и круглый бумажный фильтр несколько большего размера, который служит для улавливания падающих тлей. Фольга предохраняет фильтр от увлажнения.
Результаты оценивают под стереомикроскопом через 3 ч после начала опыта так же, как в тесте с зеленой персиковой тлей.
Для быстрых тестов с погружением пригодны следующие концентрации инсектицидов (А — зеленая персиковая тля; Б — свекловичная тля): Би 58 э. к. (38% димеоата) —0,4% (А) и 0,2% (Б); вофатокс-концентрат 50 (50% паратион-метила) — 0,01% (А, Б); пиримор 50 с. п. (50% пиримикарба) — 0,01% (А) и 0,02% (Б). Другие данные можно найти в работе Отто с соавт.
Данный тест, разработанный специально для определения устойчивости к инсектицидам у полновозрастных колорадских жуков, следует проводить только в мае и июне. Для одного теста нужно 80 взрослых особей (40 самцов и 40 самок). Если жуков собирали на картофельном поле, не обработанном ядохимикатами, испытание можно проводить уже на следующий день, в противном случае следует принять в расчет период ожидания — от 4 до 7 дней.
До испытания жуков содержат в чашках Петри и с избытком снабжают свежими листьями картофеля. Перед началом опыта всю популяцию делят на четыре повторности по 20 жуков в каждой (по 10 самок и самцов), причем одна из повторностей служит контролем, и переносят в чашки Петри диаметром 9 см, выстланные круглыми бумажными фильтрами.
На каждый вариант берут по три мелких листа картофеля, кладут в стеклянные чашки, с помощью ручного опрыскивателя полностью увлажняют испытываемым инсектицидом заданной концентрации (10 мл) и затем распределяют по приготовленным сосудам (диаметр и высота от 12 до 14 см). Далее, в тех же стеклянных чашках, где проводилось опрыскивание листьев, обрабатывают инсектицидами жуков из расчета 5 мл раствора на каждую повторность. После этого жуков также размещают по трем приемным сосудам. В четвертом сосуде (контроль) находятся необработанные жуки и листья.
Оценку результатов можно начинать через 24 ч после обработки инсектицидами. При этом подсчитывают долю мертвых и пораженных жуков. Устойчивость считается доказанной, если из всей обработанной ядохимикатами популяции более трех особей (50%) сохраняют жизнеспособность.
В исследованиях можно применять следующие концентрации инсектицидов: берцема-шприц-линдан 50 (50% линдана) — 0,7%; берцема с. п. NMC-50 (50% карбарила) — 1,0%; берцема-хаптарекс (45% хлорфенвинфоса) — 0,05%.
Примечание. Все вышеуказанные тесты на устойчивость к акарицидам. и инсектицидам должны проводиться при температуре 20—24°С и относительной влажности воздуха 60—70%.