Способ извлечения эндоспермальной пленки нескольких видов лилейных и пшеницы разработала Т. Ф. Петрова (1970), отмечая, что извлечение удается лучше, если материал фиксируется жидкостями, содержащими формалин.
М. Д. Беннет с соавторами (Bennet et al., 1975), исследуя зародышевые мешки культурных злаков (пшеница, рожь, ячмень, тритикале), вычленяли их после фиксации материала ацеталкоголем (1 : 3). Авторы отметили, что лишь некоторые зародышевые мешки удавалось извлечь целыми. Они окрашивали семяпочки по Фёльгену, оставляя материал в реактиве Шиффа в течение 2 ч (с предварительным горячим гидролизом в течение 12 мин), препарировали семяпочки под лупой, затем подкрашивали зародышевые мешки уксусным или спиртовым кармином. Наблюдения вели на временных препаратах.
Следует заметить, что фактором, вызывающим частичное разрушение зародышевых мешков, здесь мог быть горячий гидролиз.
Учитывая опыт предыдущих исследователей, мы разработали следующие методы приготовления препаратов зародышевых мешков культурных злаков (пшеницы, ржи, тритикале).
I. Колосья фиксируют по Чемберлену и оставляют в фиксирующей жидкости на I—3 сут. Далее материал переводят в 70 %-ный этиловый спирт. Перед окрашиванием по Фёльгену завязи освобождают и промывают в дистиллированной воде 17—18 ч (в течение ночи). Для гидролиза материал оставляют в 1 н. HCI на 1.5 ч, затем в 5 н. НС1 на 2 ч и снова в 1 н. HCI 1 ч. После этого завязи оставляют в реактиве Шиффа на 17—18 ч в холодильнике. Вычленение проводят в капле смеси глицерина с водой (1:1) на микроскопе МБС-1 при нижнем освещении объекта и увеличении 12.5X2. Для этого очень тонкими препаровальными иглами, заточенными химическим способом (Ярошевская, 1978), раздвигают вначале ткани стенок завязи, а затем и ткани семяпочки от вентральной стороны и удаляют их. Зародышевый мешок заметен на фоне окрашенных соматических клеток благодаря интенсивной окраске антиподального комплекса. Вычлененный зародышевый мешок подкрашивают в ацетокармине, предварительно убрав с предметного стекла глицерин фильтровальной бумагой, не задев зародышевый мешок, насколько это возможно сделать. Зародышевый мешок оставляют в капле ацетокармина 2—3 мин, удаляют ацетокармин фильтровальной бумагой и наносят на зародышевый мешок каплю раствора Гойера (Freytag, 1961) (способ его приготовления см. ниже), который частично дифференцирует препарат, просветляет его и является хорошей заливочной средой. Такой препарат, подобный глицерин-желатиновому, может храниться несколько лет.
II. Материал, зафиксированный по Чемберлену, хранят в фиксаторе или 70 %-ном этиловом спирте. Вычленяют зародышевые мешки до окрашивания завязей. Делают это в капле фиксирующей жидкости или спирта. Вычлененные зародышевые мешки окрашивают пропионовым гематоксилином по Хендерсону и Лу (Henderson, Lu, 1968), используя первый из 4 предложенных авторами способов, т. е. окрашивая объект смесью растворов А и В гематоксилина и железоаммиачных квасцов (рецепты их см. ниже). Смесь готова к употреблению не ранее чем через 1 сут (!). Окрашивание происходит очень быстро. В случаях перекрашивания применяют дифференциацию 0.5 %-ным раствором железоаммиачных квасцов в 50 %-ной пропионовой кислоте. Добившись хорошего окрашивания, оттягивают жидкости и наносят на зародышевый мешок каплю раствора Гойера. Объект накрывают покровным стеклом.
С помощью разработанного нами метода удается вычленить зародышевые мешки пшеницы, ржи и тритикале начиная с 2-ядерной стадии (длина такого объекта 0.1 мм) до 7 сут и более после оплодотворения (длина такого зародышевого мешка около 1 мм). Зародышевые мешки на всех фазах развития удается вычленить целыми; в отдельных случаях теряются одна или несколько антипод