Первое указание на вирусную этиологию заболевания дает визуальное макроскопическое обследование растений в посевах (насаждениях) на наличие внешних симптомов.
Однако лишь в немногих случаях симптомы бывают настолько специфичны, что позволяют сделать достоверное заключение о вирусе — возбудителе болезни. Разные вирусы вызывают иногда однородные или мало различающиеся патологические проявления, и наоборот, одни и те же вирусы могут быть причиной разнообразных симптомов на различных видах растений. Часто встречается также смешанное заражение двумя и более вирусами. Чтобы применять меры борьбы, необходимы, как правило, точные данные о вирусах, инфицировавших растения. Кроме того, существуют патологические признаки невирусной природы, которые могут быть приняты за симптомы вирусных болезней.
Первая визуальная оценка больного растения должна сопровождаться подробным исследованием для выявления вызванных вирусами внешних и внутренних морфологических изменений, а затем применением методов прямого обнаружения вирусов или микоплазмоподобных организмов (МПО).
Выбор метода определяется поставленной задачей, его достоверностью и быстротой, а также наличием соответствующего оборудования. Поэтому приведены методы, которые можно применять не только в лабораториях, специально оборудованных для вирусологических работ. Методы, требующие электронного микроскопа и ультрацентрифуги, исключены.
Общие указания по отбору образцов действительны и в отношении проб для диагностики вирусов, но дополняются некоторыми специфическими особенностями.
— Как правило, кроме внешне больных, имеющих симптомы растений, в исследование включают внешне здоровые, бессимптомные растения того же вида; это позволяет избежать ошибочных выводов. У больных растений исследуют как пораженные, так и бессимптомные части.
— Если в момент отбора образцов лаборатория не имеет необходимых инструментов, химикатов, индикаторных растений или диагностических сывороток, нужно обеспечить краткосрочное или более длительное хранение отобранных проб.
Краткосрочное хранение возможно в холодильнике при +4°С, растения закладывают в пленочных пакетах для защиты от высыхания. Для длительного хранения материал может быть глубоко заморожен, однако следует иметь в виду, что не все вирусы при этом сохраняют инфекционность. Щадящие условия консервации обеспечивает высушивание над хлористым кальцием. В чашки Петри диаметром 15 см вносится хлористый кальций, сверху накладывается слой марли, на который раскладывают кусочки листьев без крупных жилок. Чашки помещают в холодильник. Для высушивания над хлористым кальцием пригоден также эксикатор.
— Если исходного материала для исследования недостаточно, следует провести перезаражение подходящих растений-хозяев.
— Чтобы исключить вероятность посторонней инфекции, особенно высокоинфекционными вирусами, которые иногда легко переносятся при контакте, необходимо тщательно дезинфицировать почву для выращивания растений, рабочий инструмент и руки.
Дезинфекцию почвы проводят в картофелезапарнике, выдерживая ее 2 ч при 100—120°С. Небольшие количества почвы можно стерилизовать в автоклаве. Гончарные горшки выдерживают 3 ч в запарнике, 2 ч в сушильном шкафу при 120°С или же 24 ч в 2%-ном растворе формалина; в последнем случае предварительно необходимо удалить приставшую землю, а затем горшки проветрить в течение 3 дней до исчезновения запаха формалина.
Фарфоровые ступки и пестики очищают концентрированной соляной кислотой (в резиновых перчатках!), затем тщательно промывают водой (в конце — дистиллированной) и выдерживают в сушильном шкафу 30 мин при 180°С либо 2 ч при 120°С.
Стеклянную посуду тщательно обмывают мыльным раствором, затем водопроводной и дистиллированной водой и выдерживают 2 ч в сушильном шкафу при 120°С.
Стеклянные предметы для серологических работ погружают на 24 ч в хромпик (концентрированная серная кислота + избыток бихромата калия в порошке) или разведенную соляную кислоту, кипятят 20 мин в дистиллированной воде, промывают дистиллированной водой и высушивают 2 ч в сушильном шкафу при 120°С. Предметные стекла после кипячения обжигают в спирте.
Для дезинфекции рук пригодна смесь 5 частей тринатрийфосфата, 20 частей мыльной стружки и 100 частей воды, которую уваривают до полужидкого состояния. Хорошую дезинфекцию обеспечивают также медицинские средства.