1 г агара растворяют в 50 мл дистиллированной воды и кипятят 3 мин. К раствору добавляют 6 мл иода в иодистом калии (0.3 г 12 и 1 г KI в 100 мл воды), затем 14 мл 1 н. соляной кислоты. Раствор следует хорошо перемешать. Горячий раствор переливают в небольшую колбу, из которой его удобно брать стеклянной палочкой. Перед приготовлением препарата раствор разогревают на водяной бане.
Пыльцу из пыльника помещают на предметное стекло, на нее наносят каплю разогретого раствора. Пыльцу следует равномерно распределить в капле, после чего все закрыть покровным стеклом».
Окрашивание клеточных оболочек алциановым синим. «Алциановый синий относится к красителям с широким диапазоном действия. Он окрашивает кислые мукополисахариды, каллозу, клеточные оболочки, оболочку пыльцевых зерен и некоторые другие клеточные компоненты.
Химизм окрашивания алциановым синим полностью не раскрыт. Считают, что процесс взаимодействия связан с карбоксильными группами — СООН (Пирс, 1962; Кононский, 1976).
При исследовании окрашивания алциановым синим оболочек растительных клеток установлено, что окрашивающее действие красителя блокируется при воздействии пектиназой и метилированием, но восстанавливается при деметилировании. На основании этого предполагают, что окраска клеточных стенок основывается на связи красителя со свободными группами галактуроновой кислоты, входящей в состав пектиновых веществ (Benes, 1968). Кроме того, свободные кислотные группы имеются и в другом компоненте матрикса клеточных оболочек — гемицеллюлозах, в состав которых входят уроновые кислоты (галактуроновая и глюкуроновая) и которые также могут вступать во взаимодействие с алциановым синим.
Алциановый синий может быть рекомендован для исследования оболочек растительных клеток как самостоятельный краситель, а также в качестве подкрашивающего реагента. Хорошие результаты дает окрашивание препаратов гематоксилином Эрлиха или Гайденгайна с последующей подкраской алциановым синим.
Окрашивают парафиновые и замороженные срезы после фиксации их жидкостями Карнуа, Ньюкомера или формалиновых фиксаторов.
Среды, отмытые после окраски гематоксилином, помещают в 0.1 %-ный раствор алцианового синего в 3 %-ном растворе уксусной кислоты на 1—2 мин.
Можно производить окраску только алциановым синим. В этом случае срезы освобождают от парафина, обрабатывают спиртом и водой и помещают в краситель на 1—2 мин. Затем промывают в дистиллированной воде и дифференцируют в 1 %-ном растворе спирта, промывают в водопроводной воде, обезвоживают в спиртах и после обработки ксилолом заключают в бальзам. В результате клеточные оболочки окрашиваются в ярко-голубой цвет».