Парвовирусная инфекция собак (ПВИС, парвовирусный энтерит собак) — контагиозная болезнь, проявляющаяся рвотой, геморрагическим гастроэнтеритом, миокардитом, лейкопенией, дегидратацией и гибелью щенков моложе 5-месячного возраста. Поражения локализуются в тонком кишечнике и лимфоидных тканях.
Заболевание впервые зарегистрировано в Бельгии в 1976 г. Широко распространено по всему миру.
Характеристика возбудителя. Вирус относится к семейству Parvoviridae (от лат. parvus — маленький), роду Parvovirus. Диаметр вирионов 18—26 нм. Вирионы безоболочечные кубического типа симметрии. Капсид состоит из 32 капсомеров диаметром 3—4 нм. Геном представлен односпиральной линейной молекулой ДНК. На концах такая ДНК имеет двуспиральные участки («шпильки»). Значительная часть вирионов содержит минус- и плюс-нить ДНК. Репликация вирусной ДНК и сборка вирионов происходят в ядре клетки с участием полимераз клетки. В вирионах содержатся четыре белка (А, В, С, D).
Антигенная вариабельность и родство. Возбудитель ПВИС по свойствам близок вирусу панлейкопении кошек и возможно является его мутантной формой. Между ними нет физико-химических различий, однако они отличаются по чувствительности к ним клеточных систем и по гемагглютинирующей активности. Так, парвовирус собак размножается в культурах клеток собак и кошек, а парвовирус кошек (панлейкопении кошек) — только в культурах клеток кошек.
Изучением антигенного родства этих вирусов установлено наличие у них общих специфических антигенов. Различия в нуклеотидной последовательности их ДНК составляют менее 1 %.
Обнаружена разной степени антигенная общность всех парвовирусов — собак, кошек, свиней, крыс, мышей, норок и человека. Из-за наличия такого родства для человека небезопасно заболевание животных парвовирусами.
Антигенная активность. У возбудителя ПВИС она проявляется индуцированием синтеза комплементсвязывающих, вируснейтрализующих и антигемагглютинирующих антител, которые обнаруживаются на 5—7-й день после заражения и сохраняются в организме в течение двух лет.
Гемагглютинирующие свойства. Парвовирус собак гемагглютинирует эритроциты свиньи и кошки при 4 °С и pH 5,8—8,2. Однако не все штаммы вируса обладают этим свойством.
Гемадсорбирующая активность вируса не установлена.
Культивирование. Парвовирус собак культивируется в первично-трипсинизированных и перевиваемых культурах клеток собак и кошек, а также в перевиваемой линии Vero. Однако размножение вируса не сопровождается проявлением ЦПД. Для выявления антигена парвовируса собак могут быть использованы РИФ с флуоресцирующей сывороткой против лейкопении кошек, ИФА. Возможно обнаружение и титрование накопившегося в культуре клеток вируса в РГА с эритроцитами свиньи.
Клинические признаки. Заболевание приобретает массовый характер при плотности популяции собак 12 и более на 1 км2. При низкой плотности, т. е. менее 6 особей на 1 км2, инфекция практически прекращается.
Чувствительность собак к парвовирусу зависит от возраста. Чаще заболевают и гибнут щенки 4—5-месячного возраста. Летальность их может достигать 80 %. Среди взрослых собак летальность возможна до 16%.
Инкубационный период длится до 10 дней. У собак разного возраста форма болезни неодинакова. Это объясняется тем, что парвовирус преимущественно размножается в активно делящихся клетках. Значительное количество митозов наблюдается в тех или иных тканях на определенных этапах развития организма.
Так, сердечную форму болезни наблюдают у щенков 1—2-месячного возраста. Она характеризуется тахикардией, слабым пульсом, рвотой, поносом, отеком легкого, асцитом и гибелью до 96 % животных.
Кишечную форму болезни наблюдают у собак 1—9-месячного возраста. У животных появляются угнетение, рвота, жидкий, зловонный серый, желтоватый или геморрагический кал. Температура тела поднимается до 41,5 °С. На 1-4-й день болезни отмечают выраженную лейкопению (0,3—2,5 тыс/мм3).
Форма болезни может быть и смешанной, что чаще наблюдается в 1—4-месячном возрасте, причем возможно одновременно поражение и респираторного тракта. Болезнь у них длится 1—2 нед. У щенков 1— 2-месячного возраста — 1—4 дня.
Патологоанатомические изменения. Макроскопические изменения представлены геморрагическим воспалением слизистой тонкого и толстого кишечника. Внутренние органы геморрагичны.
Гистологическими исследованиями выявляют некроз эпителия крипт и лимфоидной ткани в пейеровых бляшках, лимфоузлах, тимусе. В эпителиальных клетках и мышечных волокнах сердца нередко встречаются внутриядерные включения. У щенков 1—2-месячного возраста наблюдают подострый фибринозный миокардит. Под электронным микроскопом в ядрах клеток сердечной мышцы выявляют парвовирус собак.
Локализация вируса. Раньше всего, т. е. уже в первый день после сражения, вирус обнаруживается в тимусе, на второй день — в пепельных лимфоидных органах, на четвертый день — в эпителии тонкого кишечника. В связи с этим вирус с 3-го по 7-й день после сражения активно выделяется с фекалиями. Чаще антиген парвовируса обнаруживают в дорсальной поверхности языка — 96,3 %; глотки — 81; в слизистой кишечника — 85,2; в костном мозге — 81,6 %; селезенке — 79,7; тимусе — 66,7; мезентериальных лимфоузлах — 60,4 и миндалинах — 58,5 %.
Переболевшие собаки выделяют вирус 3 нед и дольше. Вирусоносительство наблюдали до 6 мес.
Источник инфекции — больные собаки и вирусоносители. Выделение вируса во внешнюю среду происходит с фекалиями в первые 4—7 дней после заболевания. Передается вирус алиментарным и аэрогенным путями.
В естественных условиях парвонирусная инфекция наблюдается у собак всех возрастов, однако чаще и тяжелее болезнь протекает у щенков до 6-месячного возраста. Болеют также куницы и енотовидные собаки. Летальность среди их щенков достигает 30 %.
Диагностика. Предварительный диагноз на ПВИС ставят на основании эпизоотологических, клинических и патологоанатомических данных. Для подтверждения диагноза проводят лабораторные исследования.
Лабораторная диагностика. В лабораторию направляют пробы фекалий, полученные от больных животных в первые дни болезни, и парные сыворотки крови; от погибших животных берут для исследования сердечные мышцы, тонкий кишечник (чаще тощую кишку), селезенку и головной мозг.
Индикацию вируса в патологическом материале проводят экспресс-методами. Наиболее новый из них «иарво-тест», изготовленный фирмой «НПО Нарвак». Этот иммунохроматографический метод основан на использовании в качестве твердого носителя хроматографических мембран (иммунострипов) с нанесенными на них в различных зонах моноклональными антителами к различным эпитопам белков VP1 и VP2 парвовируса. Меченные коллоидным золотом антитела к VP1 являются конъюгатом, в то время как антитела к VP2 предназначены для фиксации иммунного комплекса. После внесения пробы в зону S иммунострипа иммобилизированный конъюгат связывается с антигеном, присутствующим в исследуемом материале. При этом формируется комплекс антиген + антитело. Полученный иммунный комплекс мигрирует по капиллярам мембраны, и после взаимодействия с немечеными антителами к VP2 фиксируется в зоне Т иммунострипа с появлением поперечной окрашенной полосы. Не связавшийся с антигеном конъюгат мигрирует дальше по мембране и взаимодействует с положительным контролем, иммобилизованным на иммунострипе в зоне С. Появление поперечной окрашенной полосы в этой зоне свидетельствует об активности и специфичности всех компонентов системы. Время проведения анализа 5—20 мин после внесения пробы.
Набор рассчитан на анализ пяти испытуемых проб.
Второй экспресс-метод обнаружения парвовируса — ИФА. Основу ИФА составляет иммунологическая реакция взаимодействия антигена с моноклональными антителами в лунках полистиролового планшета. В дальнейшем полученный комплекс выявляют иммунопероксидазным конъюгатом на основе поликлональных (моноклональных) антител. В случае положительной реакции конъюгат вызывает разложение субстрата — индикаторного раствора и окрашивание содержимого лунок планшета. На подготовку пробы и проведение анализа затрачивается 2,5—3 ч. Для исследования берут пробы фекалий в первые дни болезни, а также участки тонкого и толстого кишечника от павших животных, взятие в первые часы после гибели. Вирусный геном обнаруживается также с помощью ПЦР, в РИГА с антительным диагностикумом и в РГА с формалинизированными эритроцитами свиньи.
Высокорезультативно (до 48 %) обнаружение вирионов парвовируса собак под электронным микроскопом или методом иммунной электронной микроскопии в фекалиях больных животных или в ядрах эпителиальных клеток крипт кишечника.
Выделение вируса возможно с использованием высокочувствительной перевиваемой культуры клеток А-72, полученной из подкожной опухоли собаки. Вирус в культуре клеток выявляют с помощью РИФ.
Идентификация выделенного вируса осуществляется в РИФ, РТГА, РИГА, ИФА.
Ретроспективная серологическая диагностика. Проводится чаще всего в РТГА с использованием выпускаемого для этой цели диагностического набора. Уже на 4-й день болезни титры антигемагглютенинов достигают уровня 1 : 5000 — 1:16 000. Сыворотки крови считают в РТГА положительными при титре антител начиная с разведения 1 : 160 и выше. У реконвалесцентов титр антигемагглютенинов 1 : 1280— 1 : 2560 обычно держится около одного года, и такие животные устойчивы к повторному заражению.
Ретроспективная серологическая диагностика может быть также проведена с помощью РИГА, PH, ИФА, ВИЭФ (встречного иммуноэлектрофореза).
Дифференциальная диагностика. ПВИС следует дифференцировать от алиментарного и паразитарного гастроэнтеритов, чумы, при которой бывает очень высокая температура тела, конъюнктивита, ринита и поражения центральной нервной системы. Следует отличать ПВИС также от вирусного гепатита и коронавирусной инфекции собак.
Иммунитет и специфическая профилактика. Иммунитет при ПВИС включает в себя как местный секреторный, так и гуморальный. Для заболевания характерен быстрый иммунный ответ с обнаружением антител к концу первой недели как в сыворотках крови, так и в фекалиях.
Разработана и применяется в нашей стране инактивированная культуральная вакцина против парвовирусного энтерита собак. Щенков собак иммунизируют дважды с интервалом 14 дней с 60-дневного возраста. Ревакцинацию проводят в возрасте 7 мес, а собакам старше года — один раз в год.
Применяют также ассоциированные лиофилизированные живые вакцины с содержанием аттенуированного штамма парвовируса собак (Мультикан-2, -4, -6, -8) и с содержанием инактивированного вируса (Мультикан-7). Щенят вакцинируют в возрасте 8—10 нед и через 21 день после первой вакцинации, а затем взрослых собак вакцинируют ежегодно.
Для специфической профилактики ПВИС разработаны и успешно используются гетерологичные вакцины из вируса панлейкопении кошек как инактивированная, так и живая. Разработана субъединичная вакцина против ПВИС и синтетическая пептидная вакцина.
Для экстренной профилактики и лечения ПВИС у щенков применяют поливалентный иммуноглобулин, выделенный из гипериммунной сыворотки. С лечебной целью иммуноглобулин вводят объемом 2 мл 1—3 раза с интервалом 12—24 ч. Сыворотка поливалентная против ПВИС и других инфекций применяется по той же схеме. По истечении указанного времени животных подвергают профилактической вакцинации.