Прививка основана на срастании раневых поверхностей тканей или органов различных растений, при котором вирус из зараженного растения может проникнуть в здоровое и инфицировать его.
В отличие от механического переноса в результате прививки передаются все вирусы и МПО. Чтобы обеспечить надежное срастание партнеров прививки, необходимо учитывать следующее.
— Чем ближе друг к другу партнеры прививки в таксономическом отношении, тем надежнее передача вируса. Поэтому привой и подвой должны по возможности принадлежать к одному виду или родственным видам. Если партнеры относятся к одному виду, перенос вируса может происходить без срастания, но после длительного контакта (например, у земляники, привитой черешком листа).
— Для быстрого срастания очень важна хорошая жизнеспособность партнеров, в первую очередь подвоев. К моменту прививки они должны быть в фазе активного роста (у травянистых растений) и иметь хорошо развитую корневую, систему. Контрольную прививку плодовых деревьев можно проводить в стадии зимнего покоя.
— Толщина привоя должна соответствовать толщине стебля или побега, предназначенного для прививки, этим обеспечивается оптимальный контакт камбиальной ткани обоих партнеров. Место прививки следует тщательно и по возможности плотно обвязать, лучше всего лентой из полимерной пленки.
— Для прививки во время вегетации черенки, глазки (почки) или другие отбираемые органы должны быть по возможности свежими и тургесцентными. Транспирацию подвоя после прививки нужно ограничить путем применения пленки или другими средствами.
— Особое значение имеет острота режущего инструмента и выполнение гладкого среза, поскольку это позволяет обеспечить наилучший контакт партнеров прививки.
В садоводческой практике известны многочисленные способы прививки, однако для переноса вирусов применяют только некоторые из них.
Прививка черенком. Прививку черенком можно выполнять язычками, в расщеп и сближением. Прививка двумя язычками — самый надежный способ прививки древесных растений, поэтому ее применяют для предварительного тестирования плодовых деревьев. На плоскостях срезов привоя и подвоя делают надрезы, и образовавшиеся язычки при совмещении срезов вдвигаются один в другой. Этим обеспечивается особенно стабильный и тесный контакт.
Двойная прививка. Прививка двумя язычками используется для двойной прививки, применяемой при диагностике вирусов плодовых деревьев в теплице. На соответствующий подвой прививают два черенка: нижний, прилегающий к подвою от больного или проверяемого растения, и верхний — индикатор, реагирующий после срастания соответствующими симптомами.
Прививка в расщеп. Прививка в расщеп наиболее распространена при работе с травянистыми растениями. Ее же можно выполнять с побегами или черешками листа. В обоих случаях на срезе побега или черешка листа подвоя делают надрез глубиной 1—2 см. В разрез вставляют клиновидно заостренный конец прививаемого побега или черешка листа; в последнем случае половину пластинки листа срезают. Этот способ пригоден для передачи вирусов земляники и ее тестирования, но может применяться и на многих других культурных растениях.
Прививка сближением. Прививка сближением (аблактировка), называемая также прививкой вприклад, пригодна для древесных и травянистых растений, а также для прививки первых на вторые. Поэтому данный способ хорошо подходит для методически сложного обратного переноса вирусов с травянистых растений на древесные породы. Прививку можно выполнять путем простого совмещения небольших раневых поверхностей, по возможности неодревесневших побегов обоих партнеров. На поверхности срезов можно сделать надрезы в виде противоположно направленных язычков, которые входят друг в друга. Этим обеспечивается стабильный контакт партнеров прививки, что особенно важно для древесных и травянистых растений. Прививка сближением часто не дает настоящего срастания, но предшествующего раневого контакта достаточно для заражения здорового партнера. Этот же вариант, но с язычками пригоден для прививки усов земляники.
Корневая прививка. Для диагностики возбудителя пролиферации яблони (очевидно, МПО) и некоторых почвообитающих вирусов плодовых деревьев целесообразна корневая прививка. От корней больного и здорового деревьев отрезают куски длиной 8 см и толщиной 0,6—1 см. Оба отрезка соединяют способом прививки язычками, на этот двухкомпонентный комплекс прививается третий партнер — индикатор. Такую тройную комбинацию высаживают весной в горшок с почвой и при прорастании почек индикатора учитывают развивающиеся симптомы.
Окулировка и двойная окулировка. Окулировку и двойную окулировку часто применяют для экспериментального переноса вирусов, поражающих плодовые деревья. Глазок (почка), пересаженный за отделенную кору, после срастания передает вирусы с большой надежностью. При двойной окулировке на подвой прививается не менее двух глазков, верхний глазок берут от индикатора. Если привитый ниже глазок был инфицирован, на побеге, развивающемся из верхнего глазка, появляются симптомы заражения. Для повышения надежности переноса под индикаторным глазком часто прививают два глазка испытываемого растения.
Тест на Широфуген. Особой формой диагностики вирусов путем окулировки является тест на Широфуген. Декоративный сорт вишни Широфуген (Prunus serrulata) реагирует на заражение вирусом кольцевой пятнистости вишни сверхчувствительно — некрозами и камедетечением вокруг привитого больного главка. На однолетние побеги деревьев Широфуген в июле—августе прививают с обвязкой по 3—6 глазков испытываемых деревьев косточковых пород (черешни, вишни, сливы, персика, абрикоса). Через 6—8 недель обвязку снимают и места прививки осматривают на разрезах. Наличие некрозов и камедетечения указывает на заражение вирусами некротической кольцевой или хлоротической кольцевой пятнистости вишни. Однако некрозы вокруг привитого глазка могут быть вызваны и Pseudomonas syringae, что приводит к ошибочному диагнозу. Поскольку из-за сверхчувствительной реакции индикатора вирус кольцевой пятнистости не вызывает системной инфекции, на одном дереве Широфуген можно одновременно провести несколько испытаний соответственно числу однолетних побегов. Как правило, один побег индикатора используется для испытания одного образца. После окончания анализа в конце сентября — начале октября окулированные побеги можно срезать, а образовавшийся в следующем году прирост использовать для новых тестов при условии, что дерево не поражено другими системно распространяющимися вирусами.
Прививка щитком коры. Особыми достоинствами при переносе вирусов на древесных растениях обладает прививка щитком коры. Она технически легко выполнима, может проводиться в течение всего вегетационного периода с большой надежностью и удается даже между неродственными видами. С одно — или многолетних побегов испытываемых растений срезают щитки коры длиной 1—3 см, вкладывают в вырезы такого же размера на подвое и плотно обвязывают.
Массированная инокуляция. Для обеспечения высокой вероятности заражения и быстрой, сильной реакции на заражение окулировку или прививку щитком коры можно проводить как массированную инокуляцию. На однодвухлетние растения индикаторов прививают по спирали 6—8 глазков или щитков, место прививки обвязывают. Этот метод особенно целесообразен для обнаружения патогенов, вызывающих не полностью системные инфекции (например, микоплазм) или болезни с длинным инкубационным периодом (уплощенность ветвей яблони).
Отбор материала для инокуляции. Материал для прививки или окулировки отбирают из 3—5 точек кроны испытываемого дерева или куста, поскольку следует учитывать возможность неполностью системного распространения вирусов. Лучше всего брать черенки или глазки с нижней или средней части побега. При прививке черешком листа по 3—5 листьев с черешками отделяют о каждого испытываемого растения и по возможности используют без промедления.
Выбор и выращивание индикаторов. Индикаторы применяют главным образом для диагностики вирусов и МПО, поражающих плодовые деревья, особенно тех, которые не поддаются передаче механическим путем и соответственно определению с помощью травянистых индикаторов или серологических методов. В большинстве случаев индикаторами служат сравнительно восприимчивые и одновременно весьма специфически реагирующие сорта или виды плодовых деревьев. Поэтому для обнаружения различных вирозов и микоплазмозов приходится выращивать различные индикаторы. Сортимент индикаторов, пригодных и применяемых для диагностики вирусов плодовых культур, состоит из следующих видов и сортов.
Яблоня: Pyronia veitchii, R 12740—7А (предварительное тестирование). Malus platycarpa М. baccata fructo jlavo, сорта Gravensteiner, Lord Lambourne, Virginia Crab (основное тестирование).
Груша: Pyronia veitchii, Pirus calleryana tomentella (предварительное тестирование). Beurre Hardy, Lord Lambourne, С 7/1 (основное тестирование).
Вишня и черешня: Bing, Sam, F 12/1, Elberta, Shirofugen, Kwanzan, Maliis platycarpa.
Слива, абрикос, персик: Cambridge Gaga, Italian prune, Neuendorfer
Hauszwetsche, Elberta, Shirofugen, Malus platycarpa.
Земляника: клоны UC 5 и EMB из Fragaria vesca, UC 10 из F. virginiana, а также сорт Royal Souvereign.
Малина: Baumforth’s Seedling, Lloyd George, Norfolk Giant, а также черная американская малина (Rubus occidentalis).
Смородина и крыжовник: Fays Fruchtbare, Rote Hollandische (Ribes rubrum), Amos Black (R. nigrum) и (или) сеянцы черной смородины.
Древесные индикаторы выращивают в питомнике путем прививки окулировкой на здоровый подвой и используют как однолетние растения (диагностика вирусов сразу после массированной инокуляции) или как источники черенков (диагностика методами окулировки, двойной окулировки, двойной прививки черенком). Индикаторы для тестирования земляники размножают усами, для малины, смородины и крыжовника — корневыми отпрысками. Необходимо учитывать, что для проверки каждого образца нужно 3—5 растений.
Реакция индикаторов. Названные выше индикаторы, применяемые для обнаружения вирозов и микоплазмозов плодовых деревьев, в течение года после массированной инокуляции реагируют специфическими симптомами. В большинстве случаев вирозы и микоплазмозы ягодных культур при весенней инокуляции можно обнаружить в пределах 1—3 месяцев, но иногда (махровость черной смородины) — только через два года.
Дифференциальная диагностика на индикаторах. Древесные индикаторы позволяют проводить также дифференциальный диагноз по симптомам. В качестве примера можно привести линейный узор, линейную мозаику и шарку сливы, дающих на сливе очень сходные симптомы. Это вызывает необходимость дифференциации путем прививки щитком коры на определенные виды Prunus.