В результате проведения всех описанных выше опытов мы пришли к выводу, что сперматозоиды быка, которым резкое падение температуры от 37 до 0° наносит необратимые повреждения, вряд ли способны перенести быстрое охлаждение до температуры ниже 0°.
В соответствии с этим пробы спермы быка, содержащие после разбавления 15% глицерина, медленно охлаждали от 0 до —79°. В тех случаях, когда оттаивание осуществлялось быстро, процент оживших сперматозоидов был значительно выше. В пробах, охлажденных со скоростью 1° в 1 мин от 0 до —15°, а затем со скоростью 5° в 1 мин от —15 до —79°, у большинства сперматозоидов подвижность восстанавливалась при оттаивании их спустя 10 мин, 2 час или 24 час.
Подобные же результаты были получены при охлаждении обработанной глицерином спермы козла. Мы испробовали также много других многоатомных спиртов и родственных им соединений и убедились, что лучше всех защищает клетки от повреждений во время замораживания и оттаивания все же глицерин.
Важное значение медленного замораживания проб спермы, предварительно обработанной глицерином, а также преимущество глицерина в качестве защитного средства по сравнению с другими многоатомными спиртами вскоре подтвердили Эмменс и Блэкшоу. Они установили, что снижение концентрации глицерина от 15 до 7,5—10% и добавление в разбавитель спермы 1,25% арабинозы или какой-либо другой пентозы, увеличивало подвижность сперматозоидов баранов и быков после замораживания их при температуре —79° и оттаивания.