Препараты фитопатогенных грибов, хранимые в течение длительного времени, служат в первую очередь в качестве контрольного материала при идентификации.
Возможности использования возбудителей болезней, годами культивируемых in vitro, для искусственных заражений очень ограничены, так как агрессивность многих возбудителей ослабевает, а это может привести и к утрате патогенности. Явления дегенерации можно замедлить путем регулярных пересевов (при чередовании определенных питательных сред), культуры на естественных субстратах или под слоем парафинового масла и хранения при 10—15 °С в пыленепроницаемых шкафах. В большинстве случаев при проведении массовых опытов целесообразно прибегать к свежеизолированным возбудителям. И все же в практике защиты растений для облегчения диагностики удобнее иметь точно определенный контрольный материал. Ниже описаны некоторые простые способы приготовления постоянных препаратов.
Сухие препараты пораженных частей растений. Если пораженный растительный материал с плодовыми телами или спорокучками патогенов нужно сохранить на длительное время, то для ржавчинных и головневых грибов, возбудителей настоящих мучнистых рос с клейстотециями и некоторых болезней коры деревьев (виды Valsa) рекомендуется высушивание. Пораженный материал хорошо высушивают на воздухе и затем хранят в этикетированных закрытых сосудах, например стеклянных банках с завинчивающимися крышками.
В качестве контрольного материала может также служить гербарий из растений с типичными симптомами поражений. Части растений по возможности сразу после сбора прокладывают листами фильтровальной бумаги, а затем с помощью узких полосок клейкой ленты наклеивают на картон. При этом следует закреплять все имеющиеся органы гриба. Надпись должна включать название растения-хозяина и возбудителя болезни, место и год сбора. Из такого гербария некоторые грибы можно изолировать или определять в течение ряда лет.
Препараты пораженных частей растений, фиксированные в жидкости. Не содержащие хлорофилла части растений, например корни, клубни картофеля, корнеплоды свеклы, плоды и др., после очистки помещают в 2—5%-ный раствор формалина (20—50 мл торгового препарата на 100 мл дистиллированной воды). При помутнении раствор через несколько дней можно сменить. Чтобы сохранить тонкостенные органы грибов, например конидиеносцы возбудителей ложных мучнистых рос, части растений помещают в 40%-ный спирт, который также можно через несколько дней сменить. При более высокой концентрации спирта органы грибов обезвоживаются и деформируются.
Чтобы достаточно четко сохранить симптомы поражения на хлорофиллсодержащих частях растений, используют обработку сернокислой медью. В качестве примера можно привести три рецепта.
1. Части растений на 24 ч помещают в 0,5%-ный раствор CuSO4 и затем переносят в смесь из 800 мл дистиллированной воды, 100 мл 1%-ной CuSO4 и 100 мл технически насыщенной H2SO4.
2. Части растений помещают на 24 ч в 5%-ный раствор CuSO4, затем промывают в проточной воде или при многократной смене воды до тех пор, пока она не станет чистой, и переносят в 5%-ный раствор формалина.
3. Части растений помещают в кипящий раствор из одной части ледяной уксусной кислоты (насыщенного кристаллами ацетата меди) и четырех частей воды и кипятят, пока ацетат меди не вытеснит хлорофилл в клетках. После этого материал можно хранить в 5%-ном формалине или 70%-ном спирте.
Хранение спор ржавчинных и головневых грибов. Уредо-, телейто — и эцидиоспоры ржавчинных грибов, а также головневые споры можно без особых трудностей длительное время хранить на сухом материале, хотя при этом они теряют жизнеспособность. Однако при многолетнем содержании в вакууме способность к прорастанию и заражению не ослабевает, поэтому вакуум очень широко практикуется для хранения уредоспор ржавчинных грибов зерновых культур. Споры стряхивают с пораженных растений на пергаментную бумагу, тонкой акварельной кисточкой очищают от примесей и высушивают 1—2 дня над парами 35%-ной серной кислоты. Затем ими заполняют пробирку-ампулу поперечным диаметром около 8 мм, с помощью вакуум-насоса удаляют воздух и запаивают. При хранении пробирок в холодильнике при 3—5 °С способность спор к прорастанию и заражению не теряется свыше 10 лет.
Простые постоянные препараты. Чтобы сохранить на длительное время в качестве наглядного пособия отдельные органы гриба (споры, плодовые тела, особые образования мицелия) или срезы тканей, можно приготовить постоянные микроскопические препараты. В самом простом случае для этого получают обычный препарат, но не в воде, а в растворе Аманна (20 г молочной кислоты, 40 г глицерина, 20 г фенола и 20 мл дистиллированной воды) и по краям покрывают его бесцветным лаком для ногтей.
Хорошим фиксирующим материалом служит также лактофенол. Препарат помещают в 10%-ный раствор КОН на предметном стекле и осветляют при осторожном нагревании, затем тщательно промывают водой и окрашивают лактофенол-хлопковой синью. Через 5—10 мин краску удаляют чистым лактофенолом и препарат запаивают бесцветным лаком по краям покровного стекла.
Простые постоянные препараты получают и с использованием глицерин-желатина. Кусочек студенистого глицерин-желатина помещают на предметное стекло и проносят над слабым пламенем горелки, затем помещают объект и осторожно накрывают согретым покровным стеклом. Этот процесс требует навыка, так как в препарате легко образуются пузырьки воздуха, которые перед нанесением лака необходимо удалить слабым нагреванием и перемещением покровного стекла.
Примечание. При использовании постоянных микроскопических препаратов для сравнений следует учитывать, что вследствие потери воды тонкостенные объекты со временем могут более или менее сильно деформироваться.