Определение последовательных стадий развития цыпленка во времени на протяжении инкубации было дано в работе Гамбургера и Гамильтона, которая появилась сначала в виде самостоятельной журнальной статьи в 1951 г., а затем вошла в виде дополнения в последнее издание книги Лилли (1952).
Гамбургер и Гамильтон изучили изменение внешнего вида цыпленка породы леггорн на протяжении всего периода инкубации. В результате этого исследования ими были представлены фотографии цыпленка, находящегося на разных стадиях формирования, и даны соответствующие пояснения к ним. В частности, для каждой стадии указано примерное время (в часах и днях инкубации), которое требовалось для достижения зародышем соответствующей степени развития.
Каждая стадия развития цыпленка получила свой порядковый номер. Всего ими описано 46 стадий. Номером первым обозначена та стадия зародыша, которой он достиг ко времени откладки курицей яйца, последним, 46-м номером, обозначена стадия только что вылупившегося из скорлупы цыпленка.
При построении таблиц авторы исходили не из того, какой интервал во времени разделяет каждую из последующих стадий развития цыпленка, а из того, какие изменения произошли в их формировании. Такой метод в построении таблиц привел авторов к тому, что им пришлось иметь дело со стадиями, отделенными друг от друга очень неравномерными интервалами.
Указанная особенность таблиц создает определенные затруднения по использованию их в практических целях. Вместе с тем эти таблицы имеют чрезвычайно важное значение, так как с их помощью исследователь может легко установить нужную ему для эксперимента стадию зародыша, что особенно точно можно сделать для первых трех суток инкубации. В дальнейшем, при изложении собственного материала, нами неоднократно будут даны ссылки на номера стадий, соответствующих этим таблицам.
Остановимся несколько подробнее на том, какие признаки в строении зародышей использовали Гамбургер и Гамильтон для построения таблиц, характеризующих последовательные стадии развития цыпленка. В первые сутки инкубации, в течение которых зародыш проходит в своем развитии начальные 6 стадий, каждую их них они различают сначала по степени увеличения длины первичной полоски, затем по появлению головного отростка и, наконец, по образованию головной складки. На вторые сутки инкубации, в течение которых зародыш в своем развитии проходит следующие 7 стадий, каждая из них отличалась от предыдущей по прибавлению у зародыша к существующему у него ранее количеству пар сомитов следующих трех пар. В дополнение к этому, как указывают авторы, надежному для определения стадии зародыша признаку, они приводят описание процесса формирования некоторых других органов зародыша. К ним относится степень развития нервных валиков, головных пузырей, дифференцировки сердца, появление изгиба и последующие изгибы и повороты зародыша в области головы, формирование висцеральных дуг и некоторые др.
В течение третьих суток инкубации, во время которых зародыш проходит еще 8 стадий своего развития, появляющееся у него количество новых пар сомитов становится менее надежным критерием для определения стадии. Это зависит от того, что подсчет сомитов с этого времени затруднен — сначала наступающим процессом рассеивания мезодермы первой пары сомитов, а затем сгибанием хвостового конца зародыша. Поэтому, в качестве более надежного критерия для характеристики последующих стадий развития зародышей, авторы избрали степень дифференцировки видимых снаружи их органов. К их числу относятся главным образом почки конечностей и висцеральный аппарат. Обращая внимание на ранние стадии формирования амниона и аллантоиса, авторы отмечают значительную вариацию в их развитии по сравнению с уровнем формирования других органов зародыша. С пятых суток инкубации стадии зародышей, наряду с изменениями, наступающими в строении уже указанных закладок его органов, определялись по появлению у них закладки клюва, а также по последующему нарастанию ее размера. С седьмого дня инкубации для той же цели было использовано образование первых закладок перьев в виде ряда перьевых бугорков, появляющихся на дорзальной стороне зародыша, с каждой стороны от позвоночника на уровне плеча и ноги, а также дальнейший процесс их распространения по поверхности кожи. Диагностическим признаком этих стадий развития цыпленка явилось и последовательное появление склеральных сосочков глаза.
С восьмых по девятые сутки инкубации к имеющимся диагностическим признакам прибавляются еще два, годные для определения стадии развития цыпленка. Одним из них оказался размер мигательной перепонки глаза, а другим — степень дифференцировки век. По развитию указанных выше закладок органов зародыша Гамбургер и Гамильтон определяют и более поздние стадии развития цыпленка, включая 39 стадию, что по времени соответствует 13 суткам инкубации.
Следующие стадии развития цыпленка, начиная с 40 и кончая 41 стадией, проходят с 14 по 18 сутки инкубации. Наилучшими диагностическими признаками для них, по данным авторов, служат два, а именно: длина клюва и длина третьего пальца ноги. В дальнейшем, начиная с 45 стадии, оказалось, однако, что первый из них теряет свое значение для этой цели, так как длина клюва с определенного времени несколько уменьшается вследствие потери им перидермального слоя.
Подробный разбор того, по каким признакам вели определение стадий развития цыпленка Гамбургер и Гамильтон при составлении своих таблиц, нам потребовался потому, что их данные в значительной степени помогли нам при обработке собственного материала. С другой стороны, нам хотелось показать, что избранные этими авторами критерии, послужившие им для определения стадий развития цыпленка, ни в коей мере не отражают физиологического состояния изучаемого ими объекта и, в частности, не позволяют выяснить, как во время инкубации изменяются отношения зародыша с желтком яйца и яйцевыми оболочками, на основе потребления которых происходит его развитие, а также оставляют без рассмотрения то, каким образом устанавливаются новые связи развивающегося организма с атмосферным кислородом.
Интересной особенностью в подборе диагностических признаков для определения стадий развития цыпленка, сделанных Гамбургером и Гамильтоном, является то, что все они принадлежат к закладкам постоянных органов зародыша. Исключением из этого общего правила являются отдельные указания авторов на варьирующие в степени развития закладки амниона и аллантоиса на протяжении 3 и 4 суток инкубации и краткое упоминание, при попытке охарактеризовать 45 стадию развития цыпленка, о состоянии его желточного мешка и хорио-аллантоиса, или как они их называют «внезародышевых оболочек». Указания авторов об этих образованиях сводятся к простому описанию степени втяжения желточного мешка в полость тела плода. При этом они упоминают, что сосуды хорио-аллантоидной оболочки (аллантоис) содержат на этой стадии развития меньше крови и что у живого цыпленка хорио-аллантоис бывает липким.
Все таблицы иллюстраций выдержаны авторами в том же направлении, а именно: у зародышей на ранних стадиях развития отсутствует изображение сосудистого поля желточного мешка. На фотографиях более поздних стадий развития цыпленка зародыши представлены тщательно отделенными у основания пупочного стебелька от таких важных для него образований, как амнион, желточный и белковый мешки и аллантоис. При этом неизбежно были удалены и некоторые внутренние, постоянные органы зародыша, например, те отделы тонкого кишечника, которые при образовании так называемой естественной грыжи плода выпадают на некоторое расстояние в просвет пупочного стебелька.
Отдавая должное важности проделанных работ, нам представляется, однако, что изучение соотношений между степенью развития постоянных и временных органов зародыша, в сопоставлении с меняющимися между зародышем в целом и окружающей его средой отношениями, могли бы послужить наиболее ценными показателями для определения стадии развития цыпленка в отдельные дни инкубации. Такие данные смогли бы быть более интересными для познания сложного процесса развития птиц в связи с их особенностью существования в замкнутом яйцевой скорлупой пространства. Они могли бы, кроме того, оказаться более полезными и при оценке применяемого метода искусственной инкубации яиц сельскохозяйственных птиц.