В 1709 г. зима в Европе была исключительно суровой и погибло много животных и растений.
Тем не менее с наступлением весны насекомые вылупились из яиц в положенное время, как и после мягкой теплой зимы. Это явление поразило Бургаве, зарегистрировавшего температуру 14° ниже точки замерзания. Несколько лет спустя Спалланцани, приготовив смесь льда с каменной солью, получил температуру —17° (вероятно, по Реомюру, что соответствует —21°С). После добавления 70-процентной азотной кислоты температура смеси понижалась до —24° (вероятно, —30°С). Спалланцани помещал яйца некоторых насекомых, в том числе шелковичных червей, в стеклянные сосуды и погружал последние на несколько часов в замораживающие смеси. На следующую весну из этих яиц насекомые вылупились так же быстро, как и из незамороженных, но вылупившиеся насекомые не переносили температуры 7—8° ниже нуля. Пытаясь найти причину такого различия, Спалланцани отметил, что взрослые насекомые при низких температурах промерзали насквозь, тогда как содержимое яиц оставалось в жидком состоянии. По его мнению, яйца не замерзали вследствие наличия в них маслянистого вещества и эмбрионы переживали воздействие холода именно благодаря тому, что яйца не замерзали.
В XIX в. и в начале XX в. появилось много сообщений о том, что яйца некоторых пойкилотермных животных, в том числе муравьев, плодовых мух и клопов, погибают при температуре выше нуля. В некоторых опытах яйца амфибий и птиц прекрасно переносили низкие температуры, но температуру внутри яиц при этом не измеряли и эмбрионы не всегда замерзали.
Некоторую ясность в вопрос о выживаемости куриных яиц после воздействия низких температур внесли работы Морана. Он установил, что точка замерзания желтка равна —0,65°, а белка —0,45°, но в целом яйцо можно переохладить и хранить длительное время до 7 дней в незамороженном состоянии при —11°. Температура внутри яйца снижалась медленнее, чем в окружающей среде, и достигала —2,9° лишь через 24 час, а —4,6° через 30 час при такой же температуре в помещении. Из частично замороженных яиц, внутренняя температура которых держалась на уровне —2,9° в течение 118 час и на уровне —4,6° в течение 47 час, а также из яиц, переохлажденных до —11°, получали живых эмбрионов.
Когда содержимое яйца замерзало при температуре —6°, эмбрион тотчас же погибал и липовителлин желтка денатурировался. Яйца, хранившиеся при температуре чуть выше нуля, сравнительно быстро утрачивали способность к дальнейшему развитию. Это показывает, что образование льда было лишь одним из факторов, вредно влияющих на раннее развитие эмбрионов птиц при субнормальной температуре. Оптимальная температура хранения лежала в пределах от +8 и до +10°, судя по числу яиц, из которых после инкубации вылупились цыплята.