В настоящее время пробы спермы быков большинства известных мясных и молочных пород хранят в замороженном состоянии при температуре ниже —70°, причем в результате последующего оттаивания происходит лишь небольшая потеря подвижности и потенциальной оплодотворяющей способности сперматозоидов.
Однако сперма некоторых быков оказывается исключительно чувствительной к обработке глицерином, замораживанию и оттаиванию. Лишь незначительное число сперматозоидов переживает хранение при очень низких температурах в среде, содержащей глицерин. При этом оплодотворяющая способность оттаявшей спермы также сильно уменьшается. Незначительные усовершенствования в общепринятой методике добавления глицерина, охлаждения или оттаивания могут увеличить процент выживаемости сперматозоидов. В отношении же других проб спермы такие меры иногда не дают никакого эффекта, и эту сперму, конечно, не имеет смысла хранить при очень низких температурах для последующего оплодотворения. Часто невозможно обнаружить явную причину большого процента гибели сперматозоидов во время замораживания и оттаивания проб спермы. При наблюдении под микроскопом эти пробы выглядели иногда исключительно доброкачественными, судя по большому числу и хорошей подвижности сперматозоидов в свежесобранном материале.
Пробы спермы, взятые от одного и того же быка в различные дни, обычно одинаково реагируют на обработку глицерином, замораживание и оттаивание, но эякуляты, взятые последовательно у одного животного на протяжении дня, обладают различной устойчивостью к стандартной методике замораживания и оттаивания. Когда собирали два эякулята с интервалом в несколько минут, процент сперматозоидов, переживающих замораживание, был выше во второй пробе. Это связано с различиями в устойчивости клеток в обеих пробах, а не с различиями в семенной плазме. Когда отбирали 20 эякулятов в течение 4 час, процент переживших замораживание сперматозоидов до четвертой пробы увеличивался. Затем в последующих пробах он постепенно снижался. Сперматозоиды, взятые из придатка, хуже переносили замораживание, чем сперматозоиды спермы, но зато переживали хранение при температуре —79° в течение 49—83 дней в молочном разбавителе, содержащем глицерин. При осеменении этими пробами 8 из 12 коров забеременели. Сперматозоиды из хвоста придатка были более устойчивы к замораживанию, чем сперматозоиды, взятые из ампулы.