Не существует единого мнения относительно лучшего метода оттаивания проб спермы после хранения их при температуре —79, —90 или —190°.
В некоторых племенных хозяйствах путем медленного оттаивания удавалось сохранять более высокий процент подвижных и не утративших оплодотворяющей способности сперматозоидов.
Полдж считал, что наилучший способ восстановления подвижности сперматозоидов после замораживания и хранения спермы при —79° заключается в погружении каждой ампулы в отдельности в теплую воду с температурой от +38 до +40°. Качество спермы не ухудшалось после оттаивания при условии, что ампулы извлекали из воды в момент плавления последней частицы льда, пока температура содержимого была лишь на несколько градусов выше нуля. Сперма, используемая для осеменения вскоре после проведенного таким образом оттаивания, отличалась высокой оплодотворяющей способностью и прекрасной подвижностью сперматозоидов, наблюдаемой под микроскопом при согревании спермы до +38°. Если же пробу после оттаивания согревали и выдерживали при +38° и особенно если ее затем быстро охлаждали с +38 до +20° (в связи с различными подготовительными процедурами при искусственном оплодотворении), число активных сперматозоидов быстро уменьшалось. Быстро оттаянная и затем согретая до температуры не выше +20° сперма портилась после пребывания при комнатной температуре в течение 1 час. Такую порчу спермы можно свести до минимума, если ее оттаивать и хранить при постоянной температуре +5°.
В связи с этим некоторые исследователи предпочитают отогревать ампулы со спермой, охлажденные до —79°, погружая их в воду с температурой +5 или +20°. Таким образом, даже если сама процедура искусственного оплодотворения почему-либо откладывается, пробы спермы почти не разрушаются. При строгом соблюдении всех необходимых условий наилучшие результаты, однако, судя по числу забеременевших коров, дает оттаивание ампул со спермой при +40° так, чтобы температура внутри ампулы не превышала +5°.