В 1866 г., когда еще и сам механизм действия сперматозоидов в процессе оплодотворения был совершенно неясен, Мантегацца сообщил, что сперматозоиды человека переживают замораживание при —17°.
Он предсказал, что сперму быков и лошадей будут перевозить на большие расстояния, чтобы для более успешного разведения этих животных проводить с ее помощью искусственное оплодотворение. Мантегацца высказал также предположение, что от людей, погибших на поле боя, и после их смерти можно будет получить законное потомство. Эпиграфом к своей статье он поставил изречение: «Honi soit qui mal у pense» («Да будет стыдно тому, кто дурно об этом подумает» — девиз английского ордена Подвязки).
Однако Мантегацца значительно опередил свое время. Только в конце XIX в. биологи для приостановки биохимических изменений стали применять в своих исследованиях достаточно низкие температуры, а искусственное оплодотворение скота широко вошло в практику не ранее 1924 г.
Изложение работы Мантегацца Давенпортом в 1897 г., по-видимому, не привлекло большого внимания современников, хотя в это время уже было поставлено много опытов по изучению воздействия низких температур на живые клетки. Никаких других исследований по замораживанию сперматозоидов не проводили до 1938 г., когда Янель попытался консервировать Treponema pallidum при очень низких температурах. Он отметил, что, хотя все спирохеты погибали, часть человеческих сперматозоидов в тех же самых пробах переживала замораживание и последующее хранение при температуре —79, —196 и —269°. Два года спустя результаты Янеля подтвердил Шеттлс, который замораживал неразведенную сперму в капиллярах и обнаружил, что до 10% человеческих сперматозоидов переживали кратковременное охлаждение твердой углекислотой (—79°), жидким азотом (—196°) и жидким гелием (—265°). При этом наблюдались индивидуальные различия в чувствительности к сильному холоду у сперматозоидов, взятых от различных доноров. В только что взятых пробах от одного и того же донора относительное количество сперматозоидов, переживших пребывание в холодной среде в течение 5 мин, было одинаковым независимо от температуры охлаждения (—79, —196 или —269°), Если сперму перед замораживанием выдерживали несколько часов in vitro, относительное количество выживших сперматозоидов в пробах, охлажденных до указанных выше температур, уменьшалось. Уменьшалось оно и в пробах, хранившихся продолжительное время при температуре —79°.