Ньюкаслская болезнь (НБ, псевдочума птиц) — высококонтагиозная вирусная инфекция главным образом куриных, характеризующаяся пневмонией, энцефалитом и поражением внутренних органов.
Зарегистрирована на всех континентах. Наносит огромный экономический ущерб. Относится к особо опасным инфекциям. Разносится зараженной птицей, с инфицированными предметами, распространяется на большие расстояния (до 15 км) по воздуху.
Характеристика возбудителя. Возбудитель ньюкаслской болезни — вирус семейства Paramyxoviridae. Вирион размером от 120 до 300 нм содержит односпиральную минус-РНК. Оболочка вирионов имеет выступы в форме нитей длиной 8 нм и содержит белки (гемагглютинин, нейраминидазу и фермент слияния). Внутренний компонент вириона — РНК с расположенными по спирали на ней капсомерами (белок S). Внутренняя поверхность оболочки представлена мембранным белком.
В составе вируса обнаружены 3 основных и 5 минорных белковых компонентов. К основным относятся гемагглютинин, белок внутренней оболочки и белок S. Нейраминидаза — один из минорных компонентов. Белок F0 (слияния) играет основную роль в вирулентности вируса.
Устойчивость к физико-химическим воздействиям. Инфекционность, гемагглютинирующая активность и иммуногенность вируса разрушаются при 56 °С в период до 6 ч. Гемагглютинирующие свойства сохраняются при более длительной инактивации, чем инфекционные. Установлено, что вирулентность штаммов прямо не связана с термостабильностью гемагглютининов. В замороженном состоянии вирус сохраняет активность более двух лет.
Инфекционность вируса снижается под воздействием дневного света. Вирус устойчив к изменениям pH в диапазоне от 2 до 10, быстро разрушается при воздействии ультразвука. Дезинфицирующие растворы быстро убивают вирус.
Антигенная структура. Вирус содержит гемагглютинин и нейраминидазу, белки М, F и S (РНП)-антигены, различающиеся по локализации в вирионе, иммуногенности и антигенной активности.
Антигенная вариабельность и родство. Подавляющее большинство полевых и вакцинных штаммов вируса НБ в антигенном и иммунобиологическом отношениях сходно. Некоторые природно-ослабленные штаммы широко используют в качестве живых вакцин. Инфекционность вируса более чувствительна к термальной инактивации, чем его гемагглютинирующая активность.
Полевые и вакцинные штаммы в антигенном и иммунологическом отношениях сходны. Природные штаммы различаются по тропизму к нервной, легочной и энтеральной тканям, что и обусловливает различные формы болезни. Вирулентность у штаммов разная: велогенные штаммы — высоко-, мезогенные — средне- и лентогенные — маловирулентны.
Антигенная активность. Все формы НБ вызываются идентичными в антигенном отношении штаммами и протекают с образованием вируснейтрализующих, антигемагглютинирующих и комплементсвязывающих антител. Наивысший титр антител наблюдают через 3—4 нед, через 8—12 мес их не отмечают.
Геммагглютинирующие и гемадсорбирующие свойства. Вирус ньюкаслской болезни обладает гемагтлютинирующими (с эритроцитами кур, морских свинок, мышей, человека), гемадсорбирующими и гемолитическими свойствами, а также высокой интерфероногенной активностью.
Культивирование. Вирус НБ хорошо культивируется не только на восприимчивой птице, но и на куриных эмбрионах, изолированных ХАО, в культуре фибробластов КЭ, некоторых первичных и перевиваемых клетках. Репродукция вируса в культуре клеток сопровождается уплотнением цитоплазмы клеток, появлением в ней вакуолей; через 40 ч в цитоплазме некоторых клеток обнаруживают большое количество малых аморфных, эозинофильных включений.
Экспериментальная инфекция. Отмечена неодинаковая инфекционность различных штаммов вируса. Заболевание легко воспроизводится на курах, цыплятах и индюшатах вирулентными штаммами при любом методе заражения. К экспериментальному заражению восприимчивыми оказались перепела, воробьи, голуби, тетерева. При парентеральном заражении некоторые штаммы оказались патогенными для морских свинок, кошек, собак и других млекопитающих.
Клинические признаки. Инкубационный период длится от 5 до 15 дней. Симптомы болезни довольно разнообразны. Различают четыре формы клинического проявления болезни.
При первой форме — нервной — наблюдают угнетение, слабость, расстройство функций органов дыхания, диарею с водянистыми фекалиями зеленоватого цвета с примесью крови, паралич лап и крыльев. Основной патологоанатомический признак при этой форме — геморрагическое поражение пищеварительного тракта. Смертность достигает 90 %.
Вторая форма болезни характеризуется поражением органов дыхания (кашель, удушье) и нервной системы. Летальность — от 10 до 50 %.Такая форма НБ вызывается мезофильными штаммами.
Третья форма болезни — наиболее легкая. Проявляется незначительными изменениями респираторного и герминативного трактов, что сопровождается прекращением яйценоскости на 1—3 нед, кашлем.
Четвертая форма болезни протекает без клинических признаков и диагностируется серологически или выделением вируса.
Патологоанатомические изменения. При остром течении болезни они характеризуются воспалением слизистых оболочек носа и ротовой полости, полосчатыми кровоизлияниями на слизистой оболочке пищевода. У 60—70 % взрослых кур отмечают точечные кровоизлияния в виде пояска на границе железистого и мышечного отделов желудка. В тонком кишечнике отмечают появление очагов некроза и эрозии, в толстом — везикулярные папулы. В селезенке, печени, лимфоузлах и тимусе обнаруживают атрофию и некроз. Головной и спинной мозг гиперемированы.
Проникая в организм через слизистые оболочки, вирус попадает в кровеносные сосуды, в эндотелии которых размножается. Порозность стенок сосудов нарушается, и в них развиваются воспалительно-некротические процессы. Вирус, разнесенный с кровью по организму, вызывает расстройство гемодинамики с некрозодистрофическими изменениями.
Локализация вируса. Вирус локализуется в паренхиматозных органах, костном и головном мозге, мышцах, трахеальной слизи, толстом и тонком кишечниках. В период выраженной клинической картины болезни он выделяется во внешнюю среду с фекалиями, трахеальной слизью и выдыхаемым воздухом.
В организме неиммунных птиц вирус можно выделить только в начале болезни (до 10 дней). У иммунных птиц его удается определить более продолжительное время (до 19 дней) и только из железистого желудка, лимфоидных образований слепой кишки, фабрициевой сумки и мозга. Бессимптомное персистирование вируса НБ в организме иммунных птиц возможно в течение 70 дней. Персистирование может обусловить вирусоносительство и вирусовыделение, т. е. поствакцинальный иммунитет не исключает циркуляции полевых вело — и мезогенных штаммов вируса.
Источник инфекции — больная птица. Заражение здоровой птицы происходит при контакте с больной, а также через инфицированные корм и воду. Инфекция быстро распространяется аэрогенно. Больная птица выделяет вирус уже в инкубационном периоде.
Отмечено быстрое распространение заболевания при перевозке тушек вынужденно убитой птицы, использовании необезвреженной одежды, обуви. При инкубации яиц от больной птицы зародыш погибает от вируса.
Имеются данные о передаче вируса некоторыми паразитами. Так, вирус внедрялся в Ascaridae galli, из которой его можно выделить. Такую же роль играют кокцидии.
В естественных условиях вирус удавалось выделять от домашних (индейки, цесарки, утки), синантропных (голуби, вороны, галки) и диких птиц. Высказано предположение о том, что голуби — естественные носители лентогенных штаммов НБ. У норок, погибших в Голландии в 1970—1972 гг., развивался менингоэнцефалит в результате поедания потрохов инфицированной НБ птицы. Описаны случаи заражения НБ людей, у которых развивался конъюнктивит.
Диагностика. Диагноз ставят на основании эпизоотологических исследований, клинических признаков, патологоанатомических данных и результатов лабораторных исследований.
Лабораторная диагностика. В лабораторию направляют трахею, легкие, селезенку, печень, головной мозг (или голову) от свежего трупа курицы. От нескольких кур одного птичника получают парные сыворотки: в начале заболевания и спустя 2—3 нед.
Обнаружение вируса биопробой и выделение его проводят на 9—10-дневных куриных эмбрионах путем заражения их в аллантоисную полость. Через 48—72 ч эмбрионы гибнут. В аллантоисной полости при этом обнаруживают вирус с помощью РГА с эритроцитами кур. При отсутствии признаков размножения вируса на куриных эмбрионах проводят следующий пассаж (до трех раз).
Реже выделяют вирус на культуре клеток (куриных фибробластах). Через двое суток вирус вызывает ЦПД, дает положительную РГАд. В культуральной вируссодержащей жидкости в РГА обнаруживают вирус в существенно меньших титрах, чем в аллантоисной жидкости куриных эмбрионов.
В некоторых случаях ставят биопробу на неиммунных цыплятах 2—4-месячного возраста путем внутримышечного заражения. Болезнь проявляется в течение 10—12 дней.
Идентификацию вируса НБ и дифференциацию его от вируса гриппа кур, сходного по течению болезни, проводят с помощью РТГА. Для этой цели используют специально выпускаемый набор диагностических сывороток.
Перспективны новые методы обнаружения и идентификации вируса ньюкаслской болезни в ИФА, РИГА и ПЦР. Методы высокочувствительны и экспрессны.
Ретроспективная диагностика. Основана на установлении динамики титра антител в парных сыворотках в РТГА. Учитывая тот факт, что на всех птицефабриках кур регулярно вакцинируют живыми вакцинами, НБ может протекать атипично или даже латентно. Не исключена возможность выделения вакцинного вируса. Поэтому задача лаборатории — определить патогенность выделенного вируса. Доказательством патогенности выделенного вируса и персистенции эпизоотического штамма в стаде служат следующие признаки:
- гибель зараженных куриных эмбрионов через 60—72 ч после заражения (велогенные штаммы) или через 90 ч (мезогенные штаммы);
- полевые изоляты имеют в РГА низкие титры (16—128 ГАЕ), а вакцинные штаммы — высокие (более 256 ГАЕ);
- индекс внутримозговой вирулентности (метод Хенсона) на однодневных цыплятах для велогенных штаммов более 1,5, а для лентогенных — 0,2;
- у непривитой птицы, подвешенной в клетке, в неблагополучном птичнике, через 3 нед появляются антитела к вирусу НБ;
- у вакцинированной птицы через 3—4 мес после вакцинации регистрируют внезапное повышение уровня антител;
- поствакцинальные титры антител существенно ниже постинфекционных;
- повышение за период между двумя исследованиями числа серопозитивных животных свидетельствуют о распространении инфекции.
Иммунитет и специфическая профилактика. Естественно переболевшая или вакцинированная птица приобретает иммунитет, продолжительность и напряженность которого зависит от возраста птицы, биологических свойств вируса и метода введения его в организм.
Специфическая профилактика ньюкаслской болезни сегодня проводится большей частью живыми вакцинами. В СНГ широко применяют сухие вирусвакцины из штаммов Н, В1, LaSota, Бо/74/ВГНКИ. В профилактике НБ важна разработка оптимальной схемы иммунизации птицы. Наиболее подходящий возраст для первой вакцинации 10—14-й день, а для ревакцинации 5—6-я неделя.
Преимущество гранулированных форм вакцин из штаммов V4 (Австрия) и Roakin — более высокая термостабильность; их можно транспортировать без рефрижератора и смешивать с любым кормом. Пероральная вакцинация штаммом V4 стимулирует лимфоидные ткани кишечного тракта, что индуцирует секреторные иммуноглобулины и обеспечивает защиту даже при низком уровне циркуляторных гуморальных антител.
В механизме формирования ранней невосприимчивости к вирусу НБ ведущая роль принадлежит факторам клеточного иммунитета. Защитное действие гуморальных антител проявляется значительно позже.
Инактивированные вакцины против НБ готовят из вируса, размноженного в КЭ и убитого формальдегидом, β-пропиолактоном или этиленамином. Инактивированные вакцины обычно применяют в сочетании с живыми. Хороший защитный эффект получали прививая однодневных цыплят живой вакциной, а через 3 и 8 нед — инактивированной.
Обнадеживающий результат дает конструирование вируса оспы птиц, экспрессирующий гемагглютинин-нейраминидазный протеин вируса НБ. Считается, что данная векторная система может быть использована не только для получения генноинженерной вакцины против НБ, но и мультивалентной вакцины, экспрессирующей гены таких патогенных для птиц вирусов, как болезнь Марека, инфекционный ларинготрахеит, инфекционная брусальная болезнь и инфекционный бронхит кур.