Устойчивость вируса к физико-химическим факторам. Вирус инфекционной анемии лошадей может долго переживать в организме однокопытных животных и относительно устойчив к внешней среде.
Солнечные лучи инактивируют его через 1—3 часа (Г. Д. Авраменко, 1939). Кипячение убивает вирус, мгновенно. Прогревание крови, содержащей вирус, при температуре 59—60° в течение двух часов, полностью инактивирует возбудителя.
По данным Е. С. Козловой, вирус в сыворотке крови, консервированной хинозолом, погибает за 2 часа, если прогревать ее при 58°.
Вирус ИНАН чрезвычайно устойчив к низким температурам. По данным Д. И. Рожнова вирус, содержащийся в сыворотке крови, подвергнутой пятикратному замораживанию при температуре минус 72—73° и оттаиванию при 40°, сохранял свои вирулентные свойства.
Лиофилизированная кровь больной лошади сохраняла патогенные свойства в течение 117 месяцев (А. П. Губин; М. С. Шабуров, 1959) а сыворотка крови — в течение 31 месяца. В инфицированном сене вирус погибает при температуре 10—15° за 120 дней, а при 18—20° — за 98 дней.
По данным И. М. Родионова и Н. К. Олейник, в водопроводной воде вирус утрачивает вирулентность через 219 суток. В навозе при правильной биотермической обработке вирус погибает через 30 суток.
Вирус ИНАН довольно устойчив к воздействию различных химических средств. Глицерин ослабляет его после 4-месячного контакта и полностью инактивирует через 7 месяцев.
Н. К. Олейник и Л. Г. Пьяников установили, что 2—4%-ные растворы марганцовокислого калия, 20%-ные растворы хлорной, негашеной и гашеной извести не обезвреживают вирус, 2%-ные растворы едкого натра, формалина инактивируют вирус в течение 20 минут. 3%-ные растворы каменноугольного креолина, карболовой, кислоты — за 30 минут.
По данным М. А. Семенова и Е. С. Козлова, 4%-ный раствор формалина инактивирует вирус в течение 5 минут, но вирус можно реактивировать через 15 минут 2%-ным раствором аммиака; 0,5%-ный раствор фенола обезвреживает вирус через 10 месяцев.
Накаяма и Обара (Nakajama and Obara, 1964) установили чувствительность вируса к эфиру, что свидетельствует о наличии в вирусной частице липидов.
Вирус сохраняет свою активность при pH от 2,5 до 12,0, устойчив к трипсину.
Культивирование вируса ИНАН. Многочисленные попытки культивировать вирус ИНАН в развивающихся куриных эмбрионах, в организме лабораторных, домашних и диких животных, кроме однокопытных, оказались безуспешными.
Многие исследователи (Rocutanda et al., 1959, Kobayashi, 1961; Saurino et al., 1966; El-Zein, 1968) пытались найти лабораторные модели для культивирования вируса ИНАН, используя первично трипсинизированные и перевиваемые культуры клеток паренхиматозных органов эмбриона лошадей. Однако эти попытки не дали желаемых результатов, все использованные культуры, за исключением клеток костного мозга лошади, оказались нечувствительными к вирусу.
Положительные результаты получили японские ученые (Kobayashi и Kono, 1962), которые культивировали вирус ИНАН в культуре лейкоцитов лошади. Они сообщают, что вирус ИНАН размножается в культуре лейкоцитов лошади с проявлением цитопатического действия (ЦПД). Жидкостью зараженной культуры лейкоцитов удавалось воспроизвести заболевание лошадей, что, по мнению исследователей, подтверждало специфичность возбудителя. Другой японский исследователь (Watanabe, 1966) подтвердил возможность размножения вируса ИНАН в культуре клеток лейкоцитов лошади, но цитопатических изменений в этих культурах он не обнаружил.
Coggins (1969), положительно оценивая работы Кобаяши и Коно по успешному выращиванию вируса ИНАН в культуре клеток лейкоцитов, считает малоубедительными данные о том, что этот вирус вызывает цитопатические изменения. Свои возражения исследователь мотивирует тем, что культуры клеток лейкоцитов лошади не образуют монослоя, а клетки при выращивании отпадают от стекла как в зараженных, так и в незараженных культурах, вследствие чего установить характерные различия не удается.
Moore (1970) разработал метод длительного выращивания лейкоцитов лошади путем последовательных пассажей и установил, что вирус размножается в этих культурах с проявлением цитопатогенного действия.
В наших опытах по выращиванию вируса в культурах лейкоцитов лошади не было установлено цитопатических изменений клеток и, следовательно, не были подтверждены данные Кобаяши и Коно. Вместе с тем результаты исследований свидетельствуют о том, что лейкоциты лошади чувствительны к вирусу: он размножается в них и обнаруживается в культуральной жидкости отдельных пассажей, что установлено биопробой. на жеребятах (В. Е. Садиков, Н. Ы. Крюков, К. П. Юров, 1970).
По сообщению El-Zein, Myers и Segre (1968), в перевиваемой линии клеток кожи эмбриона лошади цитопатогенное действие вируса везикулярного стоматита подавлялось, если культуру предварительно заражали вирусом ИНАН. Способность вируса подавлять цитопатогенное действие вируса везикулярного стоматита (феномен интерференции) была использована авторами для разработки диагностического теста.
Нами было установлено экзальтирующее действие вируссодержащей сыворотки крови от больных анемией лошадей на вирус везикулярного стоматита в культуре лейкоцитов лошади.
Серологические свойства вируса. Японские исследователи Коно и Kobayashi (1966) показали, что инфекционную культуральную жидкость, полученную с культуры лейкоцитов лошади, можно использовать как антиген для реакции связывания комплемента с сыворотками лошадей, больных инфекционной анемией. Они установили, что комплементфиксирующие антитела появлялись у 79,1% экспериментально зараженных лошадей через 17—-40 дней после введения им вируса, у 78,2%—через 7—20 дней после появления первой температурной реакции. У некоторых животных титр антител возрастал непосредственно перед температурной реакцией или сразу после нее.
Антитела в крови больных лошадей обнаруживали от 2 до 60 дней. После исчезновения вторично в крови больных они не появлялись. Аналогичные результаты с культуральным антигеном по методике Кобаяши были получены Хэнсоном с соавт. (Henson, 1969; Ditchfield, 1967). Они считают комплемент-фиксирующий тест ценным методом в исследованиях вируса инфекционной анемии.
Антигенные свойства культурального вируса ИНАН изучал В. Е. Садиков (1970) модифицированным методом РСК с использованием нативных и очищенных фреоном культуральных вируссодержащих антигенов. Эта методика позволяет обнаруживать комплемент-фиксирующие антитела в пробах сывороток, полученных от больных лошадей в острой стадии болезни. Эти факты согласуются с результатами исследований японских ученых. В пробах сывороток гипериммунизированных овец, кроликов, а также лошадей, больных ИНАН в хронической форме, комплементфиксирующие антитела в крови не обнаружены. Клеточные антигены обладали большей специфичностью в РСК, чем нативная культуральная жидкость, что объясняется удалением балластных белков.
Мур и сотр. предложили тест преципитации, который в 1966 г. применялся в США для выявления больных лошадей. Однако в последующем авторы сами пришли к выводу о неспецифичности этой реакции. Не получили практического применения предложенные Саурино (1966) реакции иммунного прилипания и непрямой гемагглютинации, при помощи которых удавалось выделить тканевые антигены, образующиеся в крови больных лошадей под действием вируса ИНАН.
Некоторые исследователи в крови больных лошадей обнаружили вируснейтрализующие антитела к возбудителю инфекционной анемии, которые в отличие от комплементфиксирующих удерживаются там более длительное время.
Сыворотка от больных лошадей может агглютинировать эритроциты лягушки и птиц. В крови лошадей, больных инфекционной анемией, установлены изогемагглютинины. При хроматографии вируссодержащей сыворотки на ионообменнике выявляются гемолизины к эритроцитам лошади, которые, видимо, не связаны с вирусом инфекционной анемии (К. Юров, 1970).
Японские исследователи (1970) с положительными результатами применяли непрямой метод, иммунофлуоресценции для обнаружения специфического вирусного антигена ИНАН в культуре лейкоцитов лошади.
Обнадеживающие результаты были получены Коггинсом (1970), который готовил антиген из селезенки больных лошадей для реакции преципитации. Нами (К. Юров) был испытан этот метод с сывороткой от здоровых лошадей рабочих и продуцентов гипериммунной сыворотки и зараженных вирусом инфекционной анемии. Исследовали более 300 лошадей. Как правило, сыворотки от контрольных незараженных животных давали отрицательную реакцию.
С сыворотками больных лошадей получали положительную реакцию в виде 1—2 линий преципитации. Методом иммунофореза установили, что специфический антиген, находящийся в селезенке больных лошадей, в отличие от других белков селезенки обладает незначительной электрофоретической подвижностью.
Антиген с подобной электрофоретической подвижностью удается также обнаружить в сыворотке остробольных инфекционной анемией лошадей, используя для проявления кроличью антисыворотку (К. П. Юров, 1970).